BCL11A對(duì)子宮內(nèi)膜腺癌生物學(xué)行為的影響及機(jī)制初探.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)BCL11A在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)并分析其與臨床病理參數(shù)、MDM2表達(dá)水平間的關(guān)系，利用RNA干擾等技術(shù)分別從體內(nèi)外探究BCL11A對(duì)子宮內(nèi)膜腺癌生物學(xué)行為的影響及分子機(jī)制，為子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生、早期診斷、預(yù)后評(píng)價(jià)及靶向治療提供新思路。
　　方法：
　　1）通過(guò)免疫組化技術(shù)檢測(cè)BCL11A在子宮內(nèi)膜腺癌及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，分析其與臨床病理參數(shù)、MDM2表達(dá)水平的的關(guān)系，探討B(tài)CL11A在子宮內(nèi)膜

2、腺癌發(fā)病中的作用。
　　2）構(gòu)建靶向BCL11A的shRNA慢病毒干擾載體并包裝成成熟病毒顆粒，感染子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞HEC-1-B，建立穩(wěn)定干擾BCL11A的子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞株，以空載作為對(duì)照。利用CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)考察BCL11A對(duì)HEC-1-B細(xì)胞增殖生長(zhǎng)能力的影響；應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)探究BCL11A對(duì)HEC-1-B細(xì)胞侵襲遷移能力的影響。通過(guò)構(gòu)建裸鼠移植瘤模型，分析BCL11

3、A對(duì)HEC-1-B細(xì)胞致瘤能力的影響。
　　3）應(yīng)用FCM測(cè)定干擾BCL11A前后HEC-1-B細(xì)胞周期的改變，同時(shí)，應(yīng)用WB、IHC分別檢測(cè)干擾BCL11A前后 HEC-1-B細(xì)胞及移植瘤塊組織MDM2、P21等關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平的變化，初步探究BCL11A影響子宮內(nèi)膜腺癌生物學(xué)行為的分子機(jī)制。
　　4）所有數(shù)據(jù)均用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，當(dāng)P<0.05時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1）運(yùn)用免疫

4、組化技術(shù)對(duì)108例子宮內(nèi)膜腺癌及23例正常子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行BCL11A蛋白表達(dá)的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)BCL11A在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)明顯高于其在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)（χ2=4.368，P<0.05），且其表達(dá)水平隨著腫瘤病理分期的增高而下調(diào)。同時(shí)，在子宮內(nèi)膜腺癌組織中，BCL11及MDM2的表達(dá)呈明顯正相關(guān)（R2=0.3971，P<0.0001）；
　　2）CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示，干擾 BCL11a后

5、HEC-1-B細(xì)胞的體外增殖生長(zhǎng)能力明顯下降（P<0.05）；Transwell遷移實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，干擾 BCL11A后HEC-1-B細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力減弱（P<0.05）；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾BCL11A后HEC-1-B細(xì)胞體外侵襲能力減弱（P<0.05）。體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，干擾BCL11A后HEC-1-B成瘤速度顯著減慢（P<0.05）。進(jìn)而，應(yīng)用FCM檢測(cè)干擾BCL11前后HEC-1-B細(xì)胞細(xì)胞周期的

6、改變，較BCL11-NC組，BCL11-shRNA組發(fā)生G1期阻滯。WB結(jié)果顯示，干擾BCL11后，HEC-1-B細(xì)胞MDM2表達(dá)水平下調(diào)，P21表達(dá)水平上調(diào)。運(yùn)用IHC方法檢測(cè)裸鼠移植瘤塊組織中干擾BCL11A前后MDM2及P21表達(dá)水平的變化，發(fā)現(xiàn)，干擾BCL11A后，MDM2表達(dá)水平下調(diào)，P21表達(dá)水平上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　1）臨床組織分析結(jié)果表明：BCL11A在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)較其在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

7、增高，且表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜腺癌的腫瘤大小及病理分期呈負(fù)相關(guān)，而與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，可能在子宮內(nèi)膜腺癌發(fā)病的早期發(fā)揮重要作用，可能是腫瘤發(fā)生的早期預(yù)警信號(hào)，相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn) BCL11A在子宮內(nèi)膜腺癌中發(fā)揮作用可能與 MDM2有關(guān)。
　　2）干擾BCL11A表達(dá)可抑制子宮內(nèi)膜腺癌HEC-1-B細(xì)胞的體外增殖生長(zhǎng)能力、侵襲遷移能力及體內(nèi)致瘤能力，表明BCL11A對(duì)于子宮內(nèi)膜腺癌的形成有重要的作用，初步機(jī)制研究顯示BCL11A可通過(guò)上