孕激素受體基因甲基化與子宮內膜癌臨床生物學行為的研究.pdf

1、子宮內膜癌(endometrial carcinoma)是激素依賴性腫瘤，占女性生殖道腫瘤的20％-30％，嚴重危害著婦女的健康。孕激素受體(Progesterone Receptor，PR)對于正常子宮內膜的功能起到重要調節(jié)作用，但在子宮內膜癌中，PR常表達下調，其表達與臨床生物學行為相關，PR表達下調或者缺失的患者，預后差，易于轉移復發(fā)，激素治療不敏感，但是對于PR下調的機制，仍然研究不明。有研究表明基因異常甲基化可以導致其表達下調

2、或者沉默，因此本課題從表觀遺傳學方面著手，研究子宮內膜癌中PR基因異常甲基化與腫瘤臨床生物學行為的相關性。 第一部分：不同分化子宮內膜癌中孕激素受體甲基化的研究。 目的： 檢測在不同分化子宮內膜癌細胞系以及組織標本中，是否存在PR異常甲基化，PR異常甲基化在不同分化子宮內膜癌中是否存在差異，了解DNA甲基轉移酶(DNA methyltransferase，DNMT)與子宮內膜癌臨床生物學行為的相關性。 方

3、法： 在子宮內膜癌組織標本中，采用Realtime PCR法檢測組織標本中PR,DNMT1，3A，3B 表達情況，采用MSP法檢測不同分化組織標本中PR異常甲基化狀況；在不同分化子宮內膜癌細胞系中，利用MSP，BSP的方法檢測不同分化子宮內膜癌細胞系以及組織標本中PR基因甲基化的狀況，為了進一步證實PR基因甲基化與表達相關性，DNA 甲基轉移酶抑制劑(5-aza-2′-deoxycytidine，ADC)以及組蛋白去乙?；敢种?/p>

4、劑(trichostatin A，TSA)處理子宮內膜癌細胞系前后，分別采用Realtime PCR以及Western Blot的方法檢測藥物處理前后PR表達變化，采用MTT方法以及流式細胞方法檢測ADC，TSA以及孕激素P抑制細胞生長，誘導細胞凋亡的作用。 討論：通過試驗證實：子宮內膜癌組織標本以及細胞系中，存在PR基因異常甲基化，與PR表達下調關系密切。外顯子區(qū)域甲基化密度和PR表達相關，DNMT可能參與了子宮內膜癌進展。

5、 第二部分：子宮內膜癌中孕激素受體基因異常甲基化與組蛋白乙?；揎?。 目的： DNA 異常甲基化伴隨的是組蛋白乙酰化狀態(tài)的改變，我們以第一部分結果為基礎，進一步對DNA甲基化后，組蛋白乙?；癄顟B(tài)進行研究，以闡明PR 基因異常甲基化導致其表達沉默的機制，并對組織標本中組蛋白去乙?；?histone deacetylase，HDAC)進行檢測，以闡明HDAC1，6與子宮內膜癌臨床生物學行為之間的相關性。 方法

6、： 采用ChIP方法，對于子宮內膜癌細胞系中PR基因啟動子以及外顯子區(qū)域去甲基化前后，組蛋白乙?；癄顟B(tài)進行研究，由于組蛋白乙酰化受到HDAC的催化，我們利用Realtime PCR的方法對HDAC1，6在子宮內膜癌組織中的表達進行研究，以觀察HDAC的表達與腫瘤臨床生物學行為的相關性。 討論： PR甲基化后，組蛋白乙?；揎椀母淖儏⑴c了PR表達沉默，組織標本中HDAC1，6的表達增高則和患者預后較好相關。其與PR