2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  1.分離并大量培養(yǎng)能夠穩(wěn)定傳代的小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs),對其生物學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行描述及鑒定;
  2.應(yīng)用差速貼壁法對所培養(yǎng)的小鼠ADSCs進(jìn)行純化,獲得高純度的ADSCs;
  3.探究ADSCs對環(huán)磷酰胺引起的急性腎損傷的修復(fù)作用。
  方法:
  1.在無菌環(huán)境下分離提取小鼠腹股溝區(qū)脂肪組織,應(yīng)用眼科剪將其

2、剪碎至1mm3小組織塊,應(yīng)用 I型膠原酶及胰蛋白酶對其進(jìn)行消化,制成單細(xì)胞懸液,按照一定細(xì)胞濃度分裝于若干培養(yǎng)瓶中,加入適量含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基于標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng),定期換液,觀察原代細(xì)胞形態(tài)并拍照。
  2.待原代細(xì)胞爬滿培養(yǎng)瓶底80%以上時(shí),對其進(jìn)行傳代培養(yǎng),取第3代對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行凍存及復(fù)蘇,探究其生物活性。
  3.驗(yàn)證成功培養(yǎng)的第3代細(xì)胞的生物學(xué)特性,包括應(yīng)用MTT法繪制其生長曲線、通過加入

3、含有地塞米松0.1umol/L,維生素 C50umol/L,β-甘油磷酸鈉10mmol/L,胎牛血清10%的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基,誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞分化,加入含有地塞米松10umol/L,胰島素10umol/L,吲哚美辛200umol/L,IBMX500umol/L,胎牛血清10%的成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基,誘導(dǎo)其向脂肪細(xì)胞分化,探究其多分化潛能,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)方法驗(yàn)證其表面CD29、CD34、CD44、CD45的表達(dá)情況。
  4.應(yīng)用差速貼壁法

4、對所培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行提純,應(yīng)用FCM方法檢測差速貼壁法培養(yǎng)組及普通培養(yǎng)法培養(yǎng)組細(xì)胞表面CD44表達(dá)率,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
  5.取balb/c小鼠27只,隨機(jī)分為3組,分別命名為A空白對照組、B模型對照組及C模型實(shí)驗(yàn)組,于d-1天,分別給予B、C組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺,環(huán)磷酰胺濃度為10mg/ml,每只小鼠環(huán)磷酰胺用量為200mg/Kg,即每只小鼠需要注入10mg/ml環(huán)磷酰胺量為V=20m,于d0天給予B組小鼠尾靜脈注射生理鹽水0

5、.2ml,C組小鼠尾靜脈注射ADSCs0.2ml,細(xì)胞數(shù)量約為1×106,分別于d1、d3、d7應(yīng)用眼眶取血法取小鼠靜脈血,檢測血清中肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白(neutrophil gelatinaseassociated lipocalin,NGAL,又名載脂蛋白-2)水平,并留取腎臟組織,做腎臟病理及HE染色,根據(jù)國際通用急性腎小管壞死程度的評分方法,對環(huán)磷酰胺引起的急性腎損傷進(jìn)行評分,對以上數(shù)

6、據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
  結(jié)果:
  1.成功從小鼠腹股溝區(qū)脂肪細(xì)胞培養(yǎng)出脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞呈梭形,聚集、漩渦狀生長,在第2、3代具有較強(qiáng)生長能力,適于進(jìn)行科學(xué)研究,4代以后細(xì)胞仍可傳代,但是細(xì)胞形態(tài)較前有差異,細(xì)胞呈網(wǎng)狀或鋪路石樣,在本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)條件下,最多培養(yǎng)10代后,細(xì)胞增殖活性明顯降低;
  2.成功誘導(dǎo)ADSCs分化為成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞,經(jīng)茜素紅染色、油紅O染色證實(shí),細(xì)胞成功分化為成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞,所培養(yǎng)A

7、DSCs具有多分化潛能;
  3.小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞陽性表達(dá) CD29、CD44,不表達(dá) CD34、CD45;
  4.應(yīng)用差速貼壁法所提純細(xì)胞CD44表達(dá)率為72%,普通培養(yǎng)組CD44表達(dá)率為55%,兩種培養(yǎng)方法具有顯著差別(P<0.05),應(yīng)用差速貼壁法可培養(yǎng)出較高純度的ADSCs;
  5.治療第1天及第3天可見模型對照組、模型實(shí)驗(yàn)組及空白對照組相比,病理形態(tài)未見明顯差別,鏡下均可見較清晰腎小球結(jié)構(gòu),腎小管排列

8、規(guī)則,細(xì)胞排列較致密,而第7天所見模型對照組腎小球結(jié)構(gòu)稍有破壞,腎小球中細(xì)胞排列紊亂,腎小管變形,細(xì)胞核排列疏松,模型實(shí)驗(yàn)組相對于模型對照組來說,結(jié)構(gòu)稍有好轉(zhuǎn),對其腎臟病理評分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,二組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,只提示稍有差別,但所取3個(gè)時(shí)間段模型實(shí)驗(yàn)組NGAL水平均較模型對照組顯著降低(P<0.05),第3天及第7天BUN及Scr水平較模型對照組顯著降低(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.成功分離、培養(yǎng)出了小鼠ADSCs

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