酪氨酸激酶不可逆抑制劑(Transtinib)與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞臨床前研究.pdf

1、本文分為兩個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分:近年來(lái)，癌癥已經(jīng)成為嚴(yán)重影響人類健康的第一殺手，在我國(guó)每年因癌癥死亡的病例高達(dá)211萬(wàn)例。而腫瘤細(xì)胞在用藥過(guò)程中產(chǎn)生的耐藥問(wèn)題是腫瘤難以根治的重要原因之一。異常的蛋白激酶活性牽涉到眾多癌癥，因此，使用激酶抑制劑成為一個(gè)重要的治療手段，其中，以EGFR(epidermal growth factorreceptor, EGFR)為靶點(diǎn)的小分子抑制劑的研制則是抗腫瘤的熱點(diǎn)之一，表皮生長(zhǎng)因子受體

2、(EGFR)是一種受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase，RTK)，具有催化活性并受到嚴(yán)密的調(diào)控。EGFR及其家族成員包括HER2，HER3和HER4在調(diào)控細(xì)胞增殖，生存和轉(zhuǎn)移等活動(dòng)中起到極其重要的作用。因EGFR，HER2過(guò)表達(dá)和/或突變而引起的信號(hào)傳遞系統(tǒng)異常，是許多腫瘤惡變的共同特征。同時(shí)具有EGFR或HER2變化的癌癥患者一般有著更加嚴(yán)重的病情和不良的預(yù)后。
　　在過(guò)去的幾十年內(nèi)，針對(duì)EGFR的小

3、分子靶向制劑相當(dāng)成功，發(fā)展了一系列的藥物，如吉非替尼(gefitinib)，厄洛替尼(erlotinib)等，然而有激活突變的EGFR的腫瘤患者，尤其是非小細(xì)胞肺癌患者在用藥10-16個(gè)月后往往會(huì)產(chǎn)生耐藥性，而導(dǎo)致此耐藥性最重要的原因之一就是EGFR的790氨基酸產(chǎn)生突變(T790M)。因此研制針對(duì)此耐藥性的小分子靶向制劑成為目前非小細(xì)胞肺癌靶向治療的關(guān)鍵。以阿法替尼(afatinib)為代表的EGFR不可逆抑制劑通過(guò)藥物分子結(jié)構(gòu)中所含

4、有的親電基團(tuán)可實(shí)現(xiàn)與靶蛋白之間的共價(jià)結(jié)合，提高抑制劑與靶蛋白的親和力，從而增強(qiáng)抗腫瘤效果，這為解決可逆抑制劑的耐藥性問(wèn)題提供了新的思路。
　　本部分內(nèi)容將圍繞EGFR耐藥性問(wèn)題進(jìn)行研究。首先基于結(jié)構(gòu)藥物設(shè)計(jì)的原理，借助于分子對(duì)接技術(shù)，設(shè)計(jì)合成一系列喹唑啉類化合物，并對(duì)所合成和篩選的化合物進(jìn)行基本的腫瘤細(xì)胞活性及移植瘤動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)。計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)結(jié)果顯示，所設(shè)計(jì)并合成的化合物不可逆抑制作用存在。體外腫瘤細(xì)胞篩選結(jié)果顯示，所篩選

5、的三個(gè)化合物均對(duì)人表皮癌細(xì)胞系A(chǔ)431（野生型，過(guò)表達(dá)）及gefitinib耐藥性的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H1975有良好的抗增殖活性，對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的半數(shù)抑制濃度(IC50)為34 nM到95 nM，同時(shí)在人非小細(xì)胞肺癌H1975細(xì)胞系及人表皮癌A431細(xì)胞系小鼠皮下移植瘤抑制實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，化合物13C在5mg/kg/day劑量下對(duì)小鼠移植瘤有著明顯的抑制作用。綜合所有結(jié)果顯示，所合成篩選的化合物是一種潛在的抑制突變型EGFR的先導(dǎo)化合物

6、。
　　第二部分:脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞以其易分離、趨化性、多向分化潛能、免疫調(diào)節(jié)作用以及不受倫理問(wèn)題的制約等獨(dú)特的生物學(xué)特性近年來(lái)已經(jīng)成為干細(xì)胞療法研究者眼中的時(shí)代寵兒，但是其繁雜的分離培養(yǎng)手段使其工業(yè)化應(yīng)用受到了嚴(yán)重的限制，因此建立規(guī)范化的分離、培養(yǎng)及在符合FDA質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求下快速大量獲得治療量細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)工藝迫在眉睫，因此本部分內(nèi)容對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞規(guī)范化分離培養(yǎng)及體外快速大量擴(kuò)增進(jìn)行研究。
　　研究表明，我們可以在實(shí)驗(yàn)室

7、規(guī)范化的分離培養(yǎng)出符合ISCT標(biāo)準(zhǔn)的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞:具有呈成纖維樣細(xì)胞形態(tài)生長(zhǎng)的特性，陽(yáng)性表達(dá)CD73，CD90，CD105表面標(biāo)志物，不表達(dá)造血系統(tǒng)來(lái)源的CD11b or CD14，CD34，CD45，CD19 orCD79α，HLA-DR等表面標(biāo)志物的特性，和在體外誘導(dǎo)條件下，可以分化成脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、及軟骨細(xì)胞的特性。無(wú)血清培養(yǎng)條件優(yōu)化結(jié)果來(lái)看，相對(duì)有血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞，我們所采用的無(wú)血清培養(yǎng)基可以有效促進(jìn)間充質(zhì)干