版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是由于長期大量飲酒導(dǎo)致肝細(xì)胞中毒性損傷,肝臟病理改變最初表現(xiàn)為肝細(xì)胞脂肪變性、肝炎、肝纖維化,最終導(dǎo)致肝硬化。酒精性脂肪肝(alcohol fatty liver disease,AFLD)是ALD的早期表現(xiàn),其發(fā)病機(jī)理主要為脂質(zhì)代謝紊亂導(dǎo)致大量沉積于肝細(xì)胞,從而引起肝細(xì)胞脂肪變性、炎細(xì)胞侵潤及纖維化等一系列病變[2]。近幾年研究結(jié)果顯示lipin-1在脂質(zhì)代謝過
2、程中具有促進(jìn)甘油三酯合成和脂肪酸氧化雙向調(diào)節(jié)作用。在細(xì)胞質(zhì)中,lipin-1作為Mg2+依賴性的磷脂酸磷酸酶(phosphatidic acid hosphohydrolase,PAP)酶促進(jìn)甘油三酯的合成;在細(xì)胞核中,lipin-1作為轉(zhuǎn)錄共刺激因子,一方面調(diào)節(jié)脂肪酸氧化;另一方面調(diào)控脂質(zhì)合成酶活性。在AFLD的肝細(xì)胞中,酒精通過AMPKSREBP-1-lipin-1信號通路上調(diào)lipin-1的總量表達(dá),通過SIRT1-SFRS10-
3、Lpin1β/α軸上調(diào)Lpin1β/α的比例,lipin-1的高乙?;?低類泛素化其胞漿轉(zhuǎn)位,使細(xì)胞質(zhì)中的lipin-1β增多,細(xì)胞核中的lipin-1α減少。此外,酒精還可以直接促進(jìn)細(xì)胞質(zhì)中l(wèi)ipin-1β的PAP活性,抑制lipin-1α在細(xì)胞核中的作用。綜上,TG合成增多促進(jìn)了脂質(zhì)在肝細(xì)胞中聚集促進(jìn)了AFLD疾病的進(jìn)展。本研究通過酒精灌胃建立大鼠ALD模型,用病理學(xué)方法觀察組織基本病變情況,通過分子生物學(xué)方法探討lipin-1在酒
4、精性肝病發(fā)病不同時(shí)間段的表達(dá)情況表達(dá)變化,為ALD防治提供一條新的思路。
方法:選用雄性Wister大鼠50只,體重200±20g,正常飼養(yǎng)7天,隨機(jī)分出10只為正常對照組,其余40只用酒精灌胃,采用逐漸增加酒精濃度(濃度30%-60%,乙醇5-9g·kg-1·d-1)的方法,分別于第4周末隨機(jī)處死10只大鼠、8周末9只、12周末8只、16周末8只;處死后立即取出肝組織經(jīng)液氮速凍后置于-80℃冰箱。分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶連
5、反應(yīng)(RealTime-quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)和Western blot法檢測剪切因子SFRS10和lipin-1(核、漿)的mRNA和蛋白表達(dá)水平。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。
結(jié)果:
1、RT-qPCR法檢測SFRS10、總lipin-1、lipin-1α及l(fā)ipin-1β mRNA的表達(dá)。
1.1如Fig.1及Table2所
6、示,正常組大鼠肝組織中表達(dá)SFRS10較多,隨著造模時(shí)間的延長,其表達(dá)成逐漸減少趨勢,正常對照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較(0.64±0.04 VS0.54±0.03,0.42±0.05,0.35±0.03,0.20±0.05;0.20±0.05 VS0.64±0.04,0.54±0.03,0.42±0.05,0.35±0.03),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值為129.05,P<0.01)。
1.2如Fig.2及Table2
7、所示,正常組大鼠組織中總的lipin-1、細(xì)胞質(zhì)lipin-1β及細(xì)胞核lipin-1α表達(dá)均較少,隨著造模時(shí)間的延長,總的lipin-1和lipin-1β表達(dá)量均逐漸增多,lipin-1α表達(dá)逐漸減少。正常對照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較(總lipin-1:0.20±0.03 VS0.29±0.04,0.42±0.04,0.48±0.03,0.55±0.04;0.55±0.04VS0.20±0.030.29±0.04,0.42±
8、0.04,0.48±0.03;lipin-1α:0.54±0.02VS0.47±0.03,0.32±0.03,0.23±0.03,0.18±0.02;0.18±0.02 VS0.54±0.02,0.47±0.03,0.32±0.03,0.23±0.03;lipin-1β:0.11±0.02 VS0.32±0.02,0.39±0.02,0.44±0.02,0.54±0.03;0.54±0.03 VS0.11±0.02,0.32±0.02,
9、0.39±0.02,0.44±0.02),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為104.55,250.22,379.63,P<0.01)。
1.3如Fig.3及Table3所示,隨著造模時(shí)間延長,lipin-1β/α比值逐漸升高,正常對照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較(0.19±0.02 VS0.66±0.04,1.23±0.11,1.94±0.30,2.95±0.48;2.95±0.48 VS0.19±0.02,0.66±0.0
10、4,1.23±0.11,1.94±0.30,2.95±0.48),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
2、Westren blot法檢測SFRS10、總lipin-1、lipin-1α及l(fā)ipin-1β的蛋白水平表達(dá)。
2.1如Fig.5及Table3所示,正常組大鼠肝組織中表達(dá)SFRS10較多,隨著造模時(shí)間的延長,其表達(dá)量逐漸減少,正常對照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較(0.84±0.07 VS0.58±0.0
11、7,0.42±0.09,0.28±0.05;0.28±0.05 VS0.84±0.07,0.75±0.08,0.58±0.07,0.42±0.09),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值為66.53,P<0.01),其中4周組與正常對照組相比(0.84±0.07 VS0.75±0.08),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.2如Fig.6及Table3所示,正常組大鼠組織中總的lipin-1、細(xì)胞質(zhì)lipin-1β及細(xì)胞核lipin-
12、1α表達(dá)均較少,隨著造模時(shí)間的延長,總的lipin-1和lipin-1β表達(dá)量均逐漸增多,lipin-1α表達(dá)逐漸減少。正常對照組與實(shí)驗(yàn)組,16周組與其它各組比較,總lipin-1:(0.25±0.06 VS0.41±0.07,0.52±0.05,0.77±0.10,0.85±0.05;0.85±0.05 VS0.25±0.06,0.41±0.07,0.52±0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值為99.60,P<0.01),其中16周與
13、12周比較(0.85±0.05VS0.77±0.10),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);lipin-1α:(0.59±0.05 VS0.44±0.05,0.31±0.03,0.17±0.02,0.10±0.03;0.10±0.03 VS0.59±0.05,0.44±0.05,0.31±0.03,0.17±0.02),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F值為177.14,P<0.01);lipin-1β:0.13±0.03 VS0.25±0.05,0.3
14、9±0.03,0.69±0.05,0.74±0.05;0.74±0.05 VS0.13±0.03 VS0.25±0.05,0.39±0.03),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值280.47,P<0.01),其中16周與12周比較(0.74±0.05 VS0.69±0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1、酒精通過間接抑制SFRS10的表達(dá)從而影響lipin-1的表達(dá)及亞細(xì)胞定位,總的lipin-1及細(xì)胞質(zhì)中
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 胱硫醚β合成酶在酒精性肝病發(fā)病機(jī)理中的作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 神經(jīng)酰胺在酒精性肝病發(fā)病機(jī)制中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 酒精性肝病發(fā)病機(jī)制及脂肝寧防治ALD作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- Caveolin-1在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf
- FoxO1在酒精性脂肪性肝病中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- Nrf2在小鼠非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf
- 實(shí)驗(yàn)性非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制的研究.pdf
- 沉默信息調(diào)節(jié)因子1在大鼠酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)理中的作用.pdf
- 酒精性肝病
- 茶多酚干預(yù)酒精性肝病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 化濁解毒湯對酒精性肝病大鼠療效和作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 脂素Lipin-1在肝臟胰島素抵抗中的作用探討.pdf
- UPF1在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究.pdf
- PGC-1α在非酒精性脂肪性肝病中的作用.pdf
- 運(yùn)動治療在非酒精性脂肪性肝病治療中的作用研究.pdf
- 酒精性肝病肝細(xì)胞ICAM-1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 2006酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病診療指南
- Caveolin-1在小鼠非酒精性脂肪性肝病中的作用研究.pdf
- 課件:酒精性肝病
- Kupffer細(xì)胞在非酒精性脂肪性肝病中發(fā)病機(jī)制的研究.pdf
評論
0/150
提交評論