肉堿棕櫚酰轉移酶Iα(CPTIα)在酒精性肝病中發(fā)病機制的實驗研究.pdf

1、目的:酒精性肝病(Alcoholic liver disease，ALD)是由于長期大量飲酒導致的肝臟疾病。脂肪肝是ALD的早期表現形式，繼而可進展為酒精性脂肪性肝炎、肝纖維化甚至肝硬化。嚴重酗酒時可誘發(fā)廣泛肝細胞壞死，甚至肝功能衰竭。流行病學研究調查發(fā)現，我國酒精性肝病占同期肝病患者比例呈逐年上升趨勢。酒精對肝細胞的毒性作用已成為不可忽視的問題。肝臟是代謝酒精和平衡脂質代謝的核心器官。酒精代謝過程破壞脂質代謝平衡使得肝內脂肪酸氧化減少

2、，合成增多，導致肝細胞內脂質過量沉積，引起脂質毒性作用。肉堿棕櫚酰轉移酶Ⅰα(carnitinepalmitoyltransferaseⅠ，CPTⅠα)位于線粒體外膜，是調控長鏈脂肪酸進入線粒體進行脂肪酸β氧化的限速酶。實驗表明CPTⅠα表達及活性受脂聯(lián)素(Adiponectin，Adipo)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphateactivated protein kinase，AMPK)、沉默信號調控因子

3、1(Silent InformationRegulator1，SIRT1)、過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisomeproliferator-activated receptorα，PPARα)、固醇調節(jié)元件結合蛋白(Sterolregulatory element binding proteins，SREBP)等影響。我們前期研究結果顯示上游調控因子AMPK、SIRT1、Adipo等隨酒精造模時間的延長表達逐漸減少。本研究旨

4、在探討，隨造模時間延長肝組織中下游調控因子CPTⅠα表達水平及其活性的變化。
　　方法:以50只雄性Wistar大鼠為實驗對象，應用酒精灌胃方法制備酒精性肝病模型，于第4W時處死10只、8W時處死9只、12W處死8只、16W時處死8只大鼠，留取肝組織，并設置0W大鼠為對照組。組織病理學觀察肝組織脂肪變及炎癥損傷和CPTⅠα表達情況。實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real Time-quantitative Polymerase Cha

5、in Reaction, RT-qPCR)法檢測CPTⅠα的mRNA表達水平。應用蛋白印記(Western-Blot，WB)法檢測CPTⅠα的蛋白表達水平。
　　結果:
　　1、肝臟組織病理學改變
　　免疫組化方法示，CPTⅠα在酒精性肝病模型中隨著喂養(yǎng)周數的增加其表達越來越少(Fig.1-5)，肝組織脂肪變性逐漸加重。
　　2、CPTⅠα基因水平和蛋白水平均隨造模時間的延長而逐漸降低。
　　3、隨著酒精喂

6、養(yǎng)時間的延長，CPTⅠα mRNA表達水平逐漸降低。0W與4W相比表達下降(2.10±0.72 VS1.80±0.63)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。8W與12W相比CPTⅠα表達下降(1.72±0.65 VS1.13±0.68)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。8W與16W相比CPTⅠα表達明顯下降(1.72±0.65 VS0.83±0.67)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4、隨著酒精喂養(yǎng)時間的延長，CPTⅠ

7、α蛋白水平下降，0W與4W相比表達下降(1.16±0.08 VS0.94±0.06)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。8W與12W相比CPTⅠα表達下降(0.78±0.06 VS0.69±0.07)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。8W與16W相比CPTⅠα表達明顯下降(0.78±0.06 VS0.38±0.02)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　結論:
　　1、酒精喂養(yǎng)可成功制備酒精性脂肪性肝損傷大鼠模型。