頭孢菌素類仿制藥的雜質(zhì)譜研究.pdf

1、頭孢菌素仿制品種需按照ICH的雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則和EMA的《抗生素有關(guān)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)制訂指導(dǎo)原則》相關(guān)要求，對每一個品種進(jìn)行相應(yīng)的雜質(zhì)譜研究。但國內(nèi)仿制品種眾多，且頭孢菌素雜質(zhì)譜的研究具有量少且不穩(wěn)定的特點(diǎn)。按照傳統(tǒng)的制備分離方法，工作繁雜且有效性差。本論文結(jié)合已上市品種的雜質(zhì)研究信息，根據(jù)共有的降解反應(yīng)機(jī)理，采用柱切換-液質(zhì)聯(lián)用的方法，分別對已知結(jié)構(gòu)信息雜質(zhì)、未知結(jié)構(gòu)信息雜質(zhì)中異構(gòu)體雜質(zhì)、聚合物雜質(zhì)分別進(jìn)行研究。建立雜質(zhì)研究決策樹，并提出相關(guān)

2、研究規(guī)則，其主要內(nèi)容分為三個部分:
　　1.采用柱切換-LC/MS/MSn和柱切換-HRMS技術(shù)對頭孢孟多酯鈉、頭孢唑肟鈉混合雜質(zhì)對照品、頭孢替唑鈉混合雜質(zhì)對照品、頭孢曲松鈉混合雜質(zhì)對照品進(jìn)行系統(tǒng)研究。建立了頭孢菌素類仿制藥物已知結(jié)構(gòu)信息雜質(zhì)研究的決策樹:利用雜質(zhì)譜分析確定雜質(zhì)數(shù)目，通過降解試驗(yàn)來判斷是工藝雜質(zhì)或者是降解雜質(zhì)，采用LC/MS技術(shù)確定目標(biāo)雜質(zhì)分子量，并根據(jù)原料藥的質(zhì)譜裂解規(guī)律分析，推測雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)，最后通過高分辨質(zhì)

3、譜確證元素組成，確證雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式。
　　2.采用制備液相富集異構(gòu)體雜質(zhì)，利用光譜、質(zhì)譜和核磁共振技術(shù)對頭孢孟多酯鈉、頭孢唑肟鈉混合雜質(zhì)對照品、頭孢替唑鈉混合雜質(zhì)對照品、頭孢曲松鈉混合雜質(zhì)對照品中異構(gòu)體雜質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)研究。根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法及研究結(jié)果，建立頭孢菌素類仿制藥物未知結(jié)構(gòu)信息雜質(zhì)—異構(gòu)體雜質(zhì)研究的決策樹:利用液質(zhì)方法確定雜質(zhì)為異構(gòu)體，結(jié)合紫外光譜數(shù)據(jù)，判斷最大吸收波長是否一致，如果不一致，且發(fā)生藍(lán)移，推測為Δ-3異構(gòu)體雜質(zhì)，利用多級

4、質(zhì)譜中存在的特征性碎片離子，驗(yàn)證雜質(zhì)為Δ-3異構(gòu)體;如果一致，結(jié)合結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和降解試驗(yàn)來判斷異構(gòu)體雜質(zhì)種類:光降解試驗(yàn)產(chǎn)生順反異構(gòu)體，部分頭孢菌素品種通過二級質(zhì)譜的特征碎片離子可確證結(jié)構(gòu);堿性降解試驗(yàn)產(chǎn)生RS異構(gòu)體，其他降解試驗(yàn)產(chǎn)生側(cè)鏈異構(gòu)體，利用光譜和質(zhì)譜技術(shù)不能確證分析雜質(zhì)結(jié)構(gòu)，可通過制備液相富集純化目標(biāo)雜質(zhì)，利用核磁技術(shù)確證結(jié)構(gòu)。
　　3.利用中國藥典的頭孢菌素類有關(guān)物質(zhì)檢查方法，調(diào)整有機(jī)相比例，通過柱切換-LC/MS/MSn

5、技術(shù)研究頭孢唑肟鈉、頭孢氨芐、頭孢嗪咪鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢西丁鈉中二聚體雜質(zhì)，推測各類型聚合物雜質(zhì)的聚合方式，對聚合雜質(zhì)類型進(jìn)行總結(jié)。建立十八烷基硅膠柱對聚合物的檢查方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，所建立的方法可滿足二聚體雜質(zhì)的有關(guān)物質(zhì)檢查。
　　根據(jù)研究內(nèi)容，分別建立各類雜質(zhì)研究決策樹，并提出研究規(guī)則:
　　規(guī)則1.如果雜質(zhì)峰的保留時間，UV光譜和MS信息（分子量和二級質(zhì)譜碎片）與對照品相同，則認(rèn)為雜質(zhì)與對照品結(jié)構(gòu)一致。
　　規(guī)

6、則2.對工藝雜質(zhì)（反應(yīng)前體、起始物、中間體），如可以獲得實(shí)物，可參照規(guī)則1確認(rèn)結(jié)構(gòu);如無法獲得實(shí)物，應(yīng)結(jié)合MS裂解規(guī)律和HRMS數(shù)據(jù)對結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。
　　規(guī)則3.對降解雜質(zhì)，如具降解反應(yīng)機(jī)理明確，如β-內(nèi)酰胺開環(huán)、3位側(cè)鏈水解等，可根據(jù)反應(yīng)機(jī)理設(shè)計加速試驗(yàn)驗(yàn)證降解物是否符合已知的降解機(jī)理，并參照規(guī)則2對結(jié)構(gòu)進(jìn)行確證。
　　規(guī)則4.對異構(gòu)體雜質(zhì)，除了Δ3異構(gòu)和7位具有氨噻肟結(jié)構(gòu)的頭孢菌素的反式異構(gòu)，可通過光譜、質(zhì)譜技術(shù)確證結(jié)構(gòu)

7、外，其他還需要結(jié)合NMR等分析結(jié)果確證結(jié)構(gòu);對R、S異構(gòu)體至少需要H1NMR數(shù)據(jù)確證異構(gòu)位點(diǎn)。
　　規(guī)則5.建立十八烷基硅膠柱檢查聚合雜質(zhì)方法，可通過柱切換—LC/MS/MSn可確定其類型（二聚體、三聚體），并經(jīng)柱切換—HRMS技術(shù)驗(yàn)證結(jié)構(gòu)，但無法判斷其聚合位點(diǎn)。
　　本論文的研究內(nèi)容是β-內(nèi)酰胺類抗生素雜質(zhì)譜研究中的一部分，本研究內(nèi)容有助于藥物分析工作者快速、準(zhǔn)確、有效的分析頭孢菌素類仿制藥的雜質(zhì)譜，有利于國內(nèi)頭孢菌素類仿