索拉非尼對裸鼠高轉移潛能肝癌細胞移植瘤microRNAs表達的影響及其意義.pdf

1、目的:觀察索拉非尼對裸鼠移植瘤生長情況的影響并檢測腫瘤組織miRNA的表達變化，分析討論miRNA在索拉非尼抑制癌細胞增殖、抗血管形成及促上皮間質轉化（epithelial to mesenchymal transitnio，EMT）發(fā)生等過程中的調控作用。
　　方法:
　　1、建立裸鼠腹腔移植瘤模型:
　　選擇高轉移潛能人肝癌細胞株MHCC-97H建立裸鼠皮下荷瘤模型，待荷瘤長至約1.5cm3，處死荷瘤裸鼠，取出腫瘤

2、組織，將瘤塊剪成3mm直徑小塊供實驗用。實驗裸鼠分A組（實驗組）和B組（對照組），每組6只，將預先處理好的實驗用瘤組織各1塊埋入裸鼠腹腔建立裸鼠腹腔移植瘤模型。術后A組裸鼠每日索拉非尼30mg/kg(0.2ml)灌胃，日1次，B組給予等體積的溶劑，35天后處死所有裸鼠，取材。
　　2、對比索拉非尼治療組及對照組腫瘤的大小，免疫組織化學染色法檢測兩組腫瘤組織微血管密度（microvessel density，MVD）、內源性缺氧標記

3、物HIF-1α(Hypoxia-inducible factor-1α)、E-鈣粘素(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表達變化。
　　3、利用基因芯片技術檢測實驗組及對照組miRNA表達情況，并對其結果進行生物信息學分析。Gene Ontology(GO)用來分析靶基因的分子功能。靶基因的顯著性信號通路利用Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes(KEGG)進行分析。

4、>　　4、通過生物信息學結果，分析并討論miRNA在索拉非尼抑制癌細胞增殖、抗血管形成及促使EMT發(fā)生等過程所起的調控作用。
　　結果:
　　1、A、B兩組裸鼠腹腔成瘤率均為100％，實驗期間兩組裸鼠均無死亡，未見明顯肉眼轉移。
　　2、實驗組裸鼠腫瘤體積明顯小于對照組，MVD表達量明顯低于對照組，上述差異均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。實驗組HIF-1α表達量高于對照組，兩組比較具備統(tǒng)計學差異(P＜0.05);與對照

5、組相比，實驗組E-cadherin的表達明顯下調，而Vimentin表達上調，兩組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，提示索拉非尼促進上皮間質轉化的發(fā)生。
　　3、基因芯片分析miRNA表達譜的差異發(fā)現(xiàn)28個miRNAs在實驗組及對照組中差異表達，上調的miRNAs有20個，下調的miRNAs有8個。通過生物信息學分析結果判斷:miR-762、miR-150-5p明顯上調，參與調控索拉非尼抑制肝癌細胞增殖;miR-142a-3p雖

6、然上調不明顯，但參與調控多個與腫瘤血管形成相關的生物學過程;上調的miR-155-5p及下調的miR-122-5p參與EMT的發(fā)生。
　　結論:
　　1、索拉非尼具有抑制腫瘤生長及抗血管形成的雙重作用;并致腫瘤組織缺氧，誘導腫瘤上皮間質轉化的發(fā)生。
　　2、miR-762、miR-150-5p參與調控索拉非尼抑制肝癌細胞增殖的過程，miR-142a-3p參與調控抗腫瘤血管形成過程。
　　3、miR-155-5p及