阿司匹林抑制索拉非尼引起的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移潛能增強的機制研究.pdf

1、肝細胞肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC，簡稱“肝癌”）是常見的惡性腫瘤，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已是晚期，不能接受根治性手術(shù)治療，索拉非尼(sorafenib)已成為晚期肝癌患者的的一線治療藥物。但是兩個針對索拉非尼的Ⅲ期臨床試驗均發(fā)現(xiàn)，索拉非尼對晚期肝癌顯示治療效果的同時，對患者中位生存期的絕對值延長不足3個月，療效并不十分令人滿意。同時有動物實驗發(fā)現(xiàn)sorafenib這一類抗血管生成治療在抑制原發(fā)瘤的同時促進了

2、轉(zhuǎn)移瘤的生長。我們課題組張偉前期的動物實驗也發(fā)現(xiàn)sorafenib治療肝癌，能夠明顯抑制腫瘤的生長、減少肺轉(zhuǎn)移、延長荷瘤裸鼠的生存期，但是促進了腫瘤的肝內(nèi)播散并增加了外周血腫瘤細胞計數(shù)。阿司匹林(aspirin)是非甾體類抗炎藥的一種，最早應(yīng)用于解熱、鎮(zhèn)痛、抗風濕和預防心血管疾病，最近aspirin在腫瘤防治中的作用也逐漸被人們所認識。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合應(yīng)用sorafenib和aspirin能夠明顯減少sorafenib引起的肝內(nèi)播

3、散和外周血腫瘤細胞計數(shù)的增加。但是aspirin抑制sorafenib引起的腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移增加的具體機制尚不清楚，本研究進行了深入的探索。
　　腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，首先需要腫瘤細胞本身有很強的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，其次腫瘤及癌旁微環(huán)境的刺激起到了推波助瀾的作用，最后機體內(nèi)環(huán)境的影響對于腫瘤細胞能否完成轉(zhuǎn)移并在轉(zhuǎn)移靶器官重新生長起到了決定性的作用。因此，對于aspirin抑制sorafenib引起的腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移增強的機制研究我

4、們從腫瘤細胞本身、腫瘤及癌旁微環(huán)境以及機體內(nèi)環(huán)境三方面入手，這里的機體內(nèi)環(huán)境我們主要集中在血小板與腫瘤細胞的相互作用這一點。
　　1.Aspirin通過上調(diào)腫瘤細胞TIP30表達抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加
　　TIP30是一個抑癌基因，在肝癌中TIP30的過表達可抑制腫瘤細胞的生長，抑制腫瘤的侵襲。前期的研究中我們已經(jīng)證實了下調(diào)TIP30可誘導腫瘤細胞EMT表型，從而促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究中我們利用

5、高表達TIP30的HCCLM3細胞株和TIP30敲除的LM3-Lv-shTIP30細胞株以及低表達TIP30的HepG2細胞株和過表達TIP30的HepG2-Lv-TIP30細胞株進行研究。體外實驗顯示Aspirin作用于上述肝癌細胞株能夠明顯上調(diào)腫瘤細胞TIP30的表達，逆轉(zhuǎn)了sorafenib引起的腫瘤細胞TIP30表達下降以及因此誘導的EMT表型，從而減弱了腫瘤細胞的侵襲能力。體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)aspirin作用于上述四種肝癌細胞株的裸

6、鼠原位瘤模型，能夠減少腫瘤的肝內(nèi)播散，WB和免疫組化法檢測上述標本的TIP30表達證實了aspirin確實通過上調(diào)TIP30表達抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　2.Aspirin通過抑制腫瘤及癌旁微環(huán)境中SDF1-α的表達抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加
　　SDF1又稱為CXCL12，是一種趨化因子，SDF1-α通過與其受體CXCR4的結(jié)合，促進腫瘤的生長。利用經(jīng)過sorafenib治療以及聯(lián)合sorafenib和

7、aspirin治療的LM3裸鼠原位瘤標本，我們通過RT-PCR檢測了一些炎癥相關(guān)細胞因子在腫瘤和癌旁微環(huán)境中的表達情況，發(fā)現(xiàn)Sorafenib治療導致腫瘤以及癌旁微環(huán)境中鼠源性SDF1-α的mRNA表達增加，而聯(lián)合aspirin治療能夠明顯減少微環(huán)境中鼠源性SDF1-α的表達。針對SDF1-α治療前后表達的改變，我們通過免疫組化及WB檢測發(fā)現(xiàn)aspirin明顯抑制sorafenib引起的癌旁微環(huán)境中SDF1-α蛋白水平的增加，并通過EL

8、ISA檢測發(fā)現(xiàn)aspirin抑制sorafenib引起的外周血鼠源性SDF1-α濃度的升高。我們同時發(fā)現(xiàn)sorafenib體外作用于肝癌細胞株不能上調(diào)其SDF1-α的表達，說明sorafenib引起的SDF1-α表達升高主要來源于間質(zhì)細胞而非腫瘤細胞的分泌。體外實驗顯示rhSDF1-α能夠明顯促進肝癌細胞的侵襲，并上調(diào)肝癌細胞VEGF的表達。體內(nèi)實驗證明利用CXCR4抑制劑AMD3100能夠明顯減少sorafenib引起的腫瘤肝內(nèi)播散。

9、因此我們認為aspirin除了影響腫瘤細胞本身的侵襲性，還通過抑制sorafenib引起的腫瘤及癌旁微環(huán)境中SDF1-α的表達，從而抑制sorafenib引起的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的增強。
　　3.Aspirin抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加與其減少血小板與腫瘤細胞的相互作用有關(guān)
　　血小板在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用。我們發(fā)現(xiàn)Sorafenib治療導致腫瘤血管完整性的破壞，激活的血小板溢出血管腔外后在腫

10、瘤組織內(nèi)浸潤，血小板和腫瘤細胞的接觸可刺激腫瘤細胞發(fā)生EMT表型，增強腫瘤細胞的侵襲性，同時腫瘤細胞與內(nèi)皮細胞的粘附能力也增加，導致腫瘤細胞容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。而聯(lián)合應(yīng)用aspirin可以明顯減少血小板在腫瘤組織中的浸潤，從而減少腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論:
　　Aspirin抑制sorafenib引起的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移增強的機制可以從以下三個方面解釋:
　　1.Aspirin通過上調(diào)腫瘤細胞TIP30表達抑制sorafeni

11、b引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加。
　　2.Aspirin通過抑制腫瘤及癌旁微環(huán)境中SDF1-α的表達抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加。
　　3.Aspirin抑制sorafenib引起的HCC侵襲轉(zhuǎn)移增加與其減少血小板與腫瘤細胞的相互作用有關(guān)。
　　應(yīng)用價值:
　　本研究從三個方面解釋了aspirin聯(lián)合sorafenib治療可以抑制單用sorafenib引起的肝癌侵襲轉(zhuǎn)移增加的機制，為臨床上通過合并應(yīng)