鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用.pdf

1、目的:矽肺是由于長(zhǎng)期吸入大量游離二氧化硅粉塵所引起以肺部廣泛的結(jié)節(jié)性纖維化為主的疾病。矽肺是塵肺中最常見(jiàn)、進(jìn)展最快、危害最嚴(yán)重的一種類型，即使脫離暴露因素，患者肺功能仍進(jìn)行性惡化，目前尚無(wú)有效治療方法[1，2]。目前普遍認(rèn)為，巨噬細(xì)胞在矽肺的發(fā)病機(jī)制中占據(jù)至關(guān)重要的作用，而巨噬細(xì)胞異質(zhì)性與肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展也具有密切關(guān)系[3，4]。鹽皮質(zhì)激素受體(MR)激活能夠引發(fā)主動(dòng)脈、心臟和腎臟血管周圍和間質(zhì)纖維化形成，同時(shí)MR參與了單核巨噬細(xì)胞

2、表型的調(diào)節(jié)[5]。阻斷MR能否減輕矽肺纖維化程度及其作用機(jī)制尚不明確。
　　本研究擬首先探討實(shí)驗(yàn)性矽肺小鼠不同病理生理時(shí)期肺泡巨噬細(xì)胞和間質(zhì)巨噬細(xì)胞表型的動(dòng)態(tài)變化，旨在發(fā)現(xiàn)肺泡/間質(zhì)巨噬細(xì)胞異質(zhì)性與矽肺肺組織炎癥和纖維化的關(guān)系。然后，通過(guò)阻斷MR，探討MR受體拮抗劑（螺內(nèi)酯）引起巨噬細(xì)胞表型偏移的變化及其對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺急性期炎癥及后期纖維化的作用。
　　方法:
　　1100只雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為二氧化硅組（s

3、ilica組）和生理鹽水組（saline組），經(jīng)異氟烷麻醉后，采取經(jīng)口咽吸入法建立實(shí)驗(yàn)性矽肺模型，分別給予40μL二氧化硅混懸液和相同體積生理鹽水。造模后第1、3、7、14、28天取材，一半小鼠進(jìn)行經(jīng)支氣管肺泡灌洗，用于支氣管肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類計(jì)數(shù)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺泡巨噬細(xì)胞和間質(zhì)巨噬細(xì)胞亞群;另一半小鼠左肺用于病理學(xué)檢測(cè)，分別進(jìn)行HE染色、masson染色及α-SMA免疫熒光染色，右肺提取總RNA，進(jìn)行Arg-1、C

4、ol-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA表達(dá)量檢測(cè)。
　　2120只雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為生理鹽水組（saline組）、二氧化硅組（silica組）、二氧化硅加生理鹽水組（silica+saline組）及二氧化硅加螺內(nèi)酯干預(yù)組（silica+SPI組）。造模方法同上，silica+SPI組每天灌胃給予螺內(nèi)酯(10mg/kg)，silica+saline組灌胃給予同體積生理鹽水。造模后第3、14、28天取材，檢測(cè)方法同前。
　

5、　結(jié)果:
　　1 HE染色顯示，與saline組相比，silica組可見(jiàn)肺泡間隔增厚、間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)大量炎性細(xì)胞增生、浸潤(rùn)，并形成細(xì)胞團(tuán)，炎癥評(píng)分(IS)明顯增高(P＜0.001)，于第3天達(dá)到峰值。Masson染色結(jié)果顯示，silica組小鼠第14天出現(xiàn)藍(lán)染膠原纖維，膠原沉積持續(xù)增高，到第28天膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)明顯高于saline組（P＜0.001）。同樣，silica組第14、28天肺組織α-SMA含量明顯高于salin

6、e組。
　　Silica組小鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)BALF細(xì)胞總數(shù)均明顯高于saline組。silica組第1天巨噬細(xì)胞較saline組無(wú)明顯增高，隨后持續(xù)增高，于第3天后明顯高于saline組(P＜0.001)。與saline組相比，silica組第1天中性粒細(xì)胞數(shù)顯著增高，比例高于巨噬細(xì)胞，之后呈下降趨勢(shì)，至28天與saline組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　silica組第14天及28天小鼠肺組織ColⅠ mRNA、ColⅢ mRNA表達(dá)

7、量均明顯高于saline組(P＜0.05)。與saline組相比，silica組小鼠肺組織Arg-1 mRNA表達(dá)量于第1天開(kāi)始升高，至第3天明顯高于saline組小鼠(P＜0.01)，持續(xù)至第7天后呈下降趨勢(shì)，到纖維化期(15-28d)兩組無(wú)差異。
　　與saline組相比，silica組小鼠M2 AMψ(PI-CD64+CD206+)比例于第1天明顯增高(P＜0.01)，并呈現(xiàn)持續(xù)增高趨勢(shì)，至第28天顯著高于saline組。而

8、M2 IMψ(PI-CD64+CD11b+CD206+)比例于第1天顯著增高(P＜0.01)，而后呈稍下降趨勢(shì)，但直至28天仍明顯高于saline組。M1AMψ及IMψ與CVF呈一定程度正相關(guān)關(guān)系。
　　2 silica+SPI組急性炎癥期IS低于silica+saline組(P＜0.05)，而纖維化期CVF明顯減低(P＜0.01)，α-SMA陽(yáng)性區(qū)域也相對(duì)較少。
　　silica+SPI組小鼠BALF細(xì)胞總數(shù)明顯低于sil

9、ica+saline組，中性粒細(xì)胞也呈相同趨勢(shì)。silica+SPI組小鼠第3天BALF巨噬細(xì)胞數(shù)略低于silica+saline組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，纖維化期（第14d、28d），silica+saline組巨噬細(xì)胞數(shù)明顯增高，而給予螺內(nèi)酯干預(yù)組升高不明顯，因此silica+SPI組小鼠BALF巨噬細(xì)胞數(shù)明顯少于silica+saline組（P＜0.05）。
　　silica+SPI組小鼠肺組織ColⅠ、ColⅢ mRNA表達(dá)量

10、均低于silica+saline組（P值分別為＜0.05和＜0.01）。
　　與saline組相比，給予二氧化硅后纖維化期小鼠M1 AMψ比例顯著增高，而silica+SPI組小鼠M1 AMψ比例較silica+saline組明顯下降（P＜0.01）。給予螺內(nèi)酯干預(yù)小鼠M1 IMψ比例也相應(yīng)下降(P＜0.01)。
　　結(jié)論:1）實(shí)驗(yàn)性矽肺小鼠肺泡/間質(zhì)巨噬細(xì)胞由M1向M2表型偏移;2) M1肺泡/間質(zhì)巨噬細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)性矽肺小鼠