白石湯治療腹瀉型腸易激綜合征（肝郁脾虛證）的實驗研究.pdf

1、本文分兩個部分進行探討：
　　第一部分 體內實驗
　　目的:觀察白石湯對D-IBS模型大鼠血清中細胞因子IFN-、IL-10的水平及結腸黏膜MC脫顆粒表達的影響。
　　方法:將38只雄性wistar大鼠隨機分為正常組、模型組、白石湯組（低、中、高劑量）、得舒特組，正常組和模型組各7只、余每組各6只。造模前禁食12h，正常飲水。各組大鼠采用福氏Ⅳ型志賀菌和大黃煎劑及束縛應激刺激法造模。正常組:不予以造模，僅予以2ml無菌

2、生理鹽水灌胃。模型組:造模成功后，予以2ml無菌生理鹽水灌胃，每天一次;得舒特組予以得舒特混懸液2ml灌胃(含生藥3.5mg);白石湯低、中、高劑量治療組分別予以相應濃度的白石湯提取物2ml（生藥含量分別為0.6g、1.2g、2.4g）灌胃。以上各組均每天灌胃1次，連續(xù)14天。造模期間收集大鼠糞便行糞便培養(yǎng)。給藥2周結束后，處死大鼠，頸動脈采血，收集新鮮血液保存待測;取回盲部及直腸乙狀結腸交界處粘膜(距肛門3cm)，行免疫組化染色，觀察

3、結腸黏膜MC脫顆粒表達情況。
　　結果:(1)模型觀察:除正常組外，所有造模大鼠均在造模2-3天后出現(xiàn)大便溏泄，次數(shù)增多，夾有黏液等癥狀，大鼠活動減少，毛發(fā)晦暗等表現(xiàn)。糞便細菌培養(yǎng)未見痢疾桿菌。病理切片示:模型組大鼠結腸黏膜組織完整，未見炎性浸潤細胞，表示造模成功。
　　(2)大鼠血清IFN-γ、IL-10的表達:與正常組相比較，模型組大鼠血清IFN-γ明顯升高，IL-10顯著降低(P＜0.001);治療后各組大鼠血清IFN

4、-γ較之模型組均明顯降低，IL-10升高(P＜0.001);白石湯中、高劑量組大鼠血清IFN-γ較得舒特組降低明顯，IL-10明顯升高(P＜0.001)，兩者比較有統(tǒng)計學意義;白石湯低劑量組較之得舒特組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　(3)MC脫顆粒:免疫組化顯示:較之正常組，各用藥組MC數(shù)目增多，胞核深染，呈棕黃色，顆粒自胞膜內向外流出，空泡形成;得舒特組較之白石湯中、高劑量組，MC明顯脫顆粒，較之白石湯低劑量組，差異不

5、明顯。
　　結論:白石湯可通過抑制肥大細胞數(shù)目及上調抗炎因子、增強其活性，糾正抗炎/促炎因子失衡，從而達到治療D-IBS的效果。
　　第二部分 體外實驗
　　目的:探索自石湯對C48/80誘導小鼠肥大細胞瘤細胞(P815肥大細胞)釋放組胺的作用及TNF-α誘導刺激P815肥大細胞致敏環(huán)節(jié)關鍵信號PLC-γ1蛋白表達的影響。
　　方法:(1)先予白石湯、色甘酸鈉作用細胞1h，C48/80誘導P815肥大細胞脫顆粒，

6、ELISA法檢測細胞上清組胺釋放率。
　　(2)先予白石湯、色甘酸鈉作用細胞1h，不同濃度的TNF-α作用細胞2h，Western Blot法檢測致敏環(huán)節(jié)P815細胞脫顆粒相關PLC-γ1蛋白表達。
　　結果:(1)C48/80刺激P815肥大細胞脫顆粒后，模型組組胺釋放率較之正常組增高(P＜0.001);白石湯高劑量組組胺釋放率較之色甘酸鈉組顯著降低、抑制率顯著增高(P＜0.001);白石湯低劑量組較之色甘酸鈉組，差異無統(tǒng)