三維串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用蛋白質(zhì)組學(xué)分離方法的建立.pdf

1、在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，對(duì)蛋白質(zhì)或肽段混合樣品的充分分離是提高蛋白鑒定靈敏度的關(guān)鍵。多維液相色譜（multi-dimensional liquid chromatography, MDLC）分離技術(shù)結(jié)合了各種不同原理的色譜分離類型，極大地提高了分離系統(tǒng)的峰容量，能滿足高效、高可重現(xiàn)、高自動(dòng)化分離復(fù)雜蛋白質(zhì)組學(xué)樣品的要求。應(yīng)用最為廣泛的多維液相色譜分離技術(shù)是由離子交換色譜（ion-exchange chromatography, IEC）和反

2、相色譜（reversed-phase chromatography,vRPC）串聯(lián)的二維液相色譜分離方法。近年來(lái)，由于蛋白質(zhì)組學(xué)樣品鑒定深度要求的不斷提高，在二維液相色譜分離方法的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)分離的方式發(fā)展出了分離能力更強(qiáng)的三維液相色譜分離方法，并且已經(jīng)展現(xiàn)出了有效簡(jiǎn)化復(fù)雜樣品的潛力。
　　本文在傳統(tǒng)的二維液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法的基礎(chǔ)上，分別采用肽段水平樣品預(yù)分離和蛋白水平樣品預(yù)分離，建立了兩種三維液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分

3、析方法。小鼠乳腺癌細(xì)胞系4T1細(xì)胞裂解液作為復(fù)雜蛋白質(zhì)組學(xué)樣品的實(shí)例，在其中進(jìn)行了分離和檢測(cè)。在基于肽段預(yù)分離的三維液相色譜分離系統(tǒng)下，鑒定到的蛋白數(shù)目是傳統(tǒng)二維液相色譜分離系統(tǒng)中鑒定到的2倍，表明分離系統(tǒng)維度的提高使復(fù)雜樣品進(jìn)一步簡(jiǎn)化，有助于蛋白鑒定能力的提高；而在基于蛋白預(yù)分離的三維液相色譜分離系統(tǒng)下，蛋白鑒定的效率更高，鑒定到的蛋白數(shù)目是傳統(tǒng)二維液相色譜分離系統(tǒng)中鑒定到的2.4倍，并且高豐度蛋白的富集程度更高，表明在蛋白水平進(jìn)行樣