穿心蓮內(nèi)酯對胃癌SGC-7901細(xì)胞G2-M期的周期抑制與誘導(dǎo)線粒體途徑凋亡的研究.pdf

1、穿心蓮作為一種傳統(tǒng)中草藥主要用于治療感冒咳嗽，發(fā)燒，喉炎和一些感染性疾病。近年來，人們發(fā)現(xiàn)其提取物中有一種活性成分——穿心蓮內(nèi)酯，具有治療多種疾病的功能，其中就包括對各種腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。因此，在癌癥的化療上具有很好的潛在價(jià)值。胃癌是一種高發(fā)的惡性腫瘤疾病，好發(fā)年齡在50歲以上，男女比例為2∶1。目前臨床上對于胃癌治療手段還只限于手術(shù)治療，化療和放射治療;而且對于保守治療化療的藥物治療效果較差，因此找到新型的抗腫瘤藥物或者聯(lián)合用藥具有

2、重要意義。本研究重點(diǎn)是探索穿心蓮內(nèi)酯對胃癌細(xì)胞SGC-7901的生長是否抑制和作用機(jī)理。
　　細(xì)胞活力檢測實(shí)驗(yàn)(MTT)表明:SGC-7901細(xì)胞在不同濃度處理24和48小時(shí)后，穿心蓮內(nèi)酯對腫瘤細(xì)胞具有濃度時(shí)間依賴的生長抑制效果;流式細(xì)胞技術(shù)檢測到藥物處理過后的細(xì)胞被抑制在G2/M期，并且伴有內(nèi)源途徑凋亡的發(fā)生;并發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)的ROS水平上升和線粒體膜電位的下降現(xiàn)象。Hoechst33258染色進(jìn)一步證明細(xì)胞凋亡的存在;蛋白免疫印跡

3、法(western blot)檢測到周期與凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化;藥物處理過后，胃癌細(xì)胞內(nèi)的ATP以及GSH水平明顯下調(diào);NANDP補(bǔ)償實(shí)驗(yàn)觀察到細(xì)胞的周期抑制得到恢復(fù)，但是β-萘黃酮預(yù)處理加強(qiáng)了穿心蓮內(nèi)酯對周期的抑制。
　　p53蛋白表達(dá)量上調(diào)，與調(diào)控G2/M期的關(guān)鍵蛋白p-cdc2表達(dá)量上調(diào)、Cyclin B1表達(dá)水平下調(diào)表明，穿心蓮內(nèi)酯對細(xì)胞的周期抑制的確發(fā)生在G2/M期，同時(shí)調(diào)控cdc2活性的蛋白cdc25與其活性調(diào)控

4、蛋白Chk2分別下調(diào)與上調(diào)表明穿心蓮內(nèi)酯造成的G2/M期抑制與DNA損傷有關(guān);Cleaved Caspase-3，Cleaved Caspase-9，和細(xì)胞色素c上調(diào)以及Bax的上調(diào)，Bcl-2的下調(diào)揭示穿心蓮內(nèi)酯同時(shí)誘導(dǎo)了細(xì)胞線粒體內(nèi)源途徑的凋亡。
　　細(xì)胞內(nèi)GSH和ATP水平的下降與流式檢測到的ROS水平上升和膜電位的崩潰一致，ROS消除劑NAC與NADPH預(yù)處理后，對藥物造成的GSH和ATP下降有所恢復(fù)。此外NADPH的加入

5、還恢復(fù)了周期抑制，下調(diào)了p53，p-cdc2與Cyclin B1以及抑制了Cleaved Caspase-9，Bax的上調(diào)與Bcl-2的下調(diào)。這些說明穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo)的周期抑制和線粒體內(nèi)源途徑的凋亡與活性氧有關(guān)。
　　總之，穿心蓮內(nèi)酯是通過上調(diào)胞內(nèi)ROS水平使得線粒體膜電位崩潰，進(jìn)而通過p53/cdc2/Cyclin B1和Chk2/cdc25/cdc2信號通路誘發(fā)G2/M期的周期抑制與內(nèi)源途徑的凋亡誘導(dǎo)抑制SGC-7901細(xì)胞的生