APOL1基因變異對(duì)中國(guó)FSGS患者影響的研究.pdf

1、局灶節(jié)段腎小球硬化（FSGS）是難治性腎病綜合征和終末期腎病最常見(jiàn)的原因之一，遺傳因素在其發(fā)病和進(jìn)展中起重要作用。前期研究顯示APOL1的G1和G2變異與FSGS的發(fā)病與進(jìn)展密切相關(guān)。但該結(jié)果并沒(méi)有在中國(guó)人群中得到重復(fù)。提示我國(guó)FSGS可能存在其他APOL1變異。
　　本研究的目的是：（1）對(duì)APOL1基因單核苷酸多態(tài)性和單體型進(jìn)行分析，探索APOL1基因單體型對(duì)不同人群中疾病的易感性。（2）檢測(cè)FSGS患者和正常對(duì)照組中APOL

2、1基因拷貝數(shù)的情況，通過(guò)比較拷貝數(shù)變異在兩組的分布情況，探索APOL1基因拷貝數(shù)變異對(duì)中國(guó)FSGS患者臨床治療與預(yù)后之間的可能意義。（3）利用本課題組前期發(fā)現(xiàn)的APOL1新突變，構(gòu)建突變質(zhì)粒和野生型質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到永生化的足細(xì)胞，研究該APOL1突變對(duì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白、細(xì)胞骨架和離子通道的影響，并探索其參與FSGS足細(xì)胞損傷的可能機(jī)制。
　　我們的研究方法包括（1）從千人基因組數(shù)據(jù)中篩選 APOL1基因 SNP，統(tǒng)計(jì)不同區(qū)域APOL1單體型

3、，并比較每個(gè)單體型在不同人群中的分布情況。（2）篩選符合條件的FSGS患者DNA樣本；通過(guò)設(shè)計(jì)APOL1引物和探針進(jìn)行Taqman拷貝數(shù)變異實(shí)驗(yàn)；使用Copy Caller軟件分析結(jié)果，SPSS分析FSGS患者與正常對(duì)照組中APOL1基因拷貝數(shù)分布差異及不同拷貝數(shù)的FSGS患者臨床預(yù)后的差異。（3）將突變質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至細(xì)胞后動(dòng)態(tài)追蹤細(xì)胞形態(tài)的改變，western blot檢測(cè)足細(xì)胞標(biāo)志蛋白，自噬標(biāo)志物，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白分子的表達(dá)水平；激光共聚焦

4、檢測(cè)足細(xì)胞骨架的改變及線粒體損傷情況，并用膜片鉗技術(shù)檢測(cè)足細(xì)胞膜離子通道的變化。
　　研究結(jié)果顯示（1）APOL1基因各個(gè)區(qū)域的單體型在不同人群的分布都具有明顯差異。大部分單體型在混合人群和歐洲人群的頻率相對(duì)較高，有2個(gè)單體型在亞洲人群中的分布頻率高于其他種群。（2）FSGS患者和正常組之間 APOL1基因拷貝數(shù)分布情況沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多拷貝數(shù)和低拷貝數(shù)的FSGS患者之間治療后的緩解率無(wú)顯著差異。（3）轉(zhuǎn)染突變質(zhì)粒的足細(xì)胞細(xì)胞骨架

5、蛋白排列紊亂，細(xì)胞發(fā)生溶解，細(xì)胞間隙增大，間接反映了足細(xì)胞足突的收縮；足細(xì)胞標(biāo)志蛋白表達(dá)下降，P38MAPK、SAPKs和JNK等信號(hào)通路被激活；此外，APOL1新突變可能破壞了細(xì)胞膜氯離子通道蛋白。
　　在本研究中，我們從三個(gè)層面分析了APOL1基因變異與FSGS的關(guān)系。結(jié)果表明，APOL1基因的單核苷酸多態(tài)性在不同人群中分布有明顯差異。其拷貝數(shù)變異與我國(guó)FSGS易感性無(wú)密切相關(guān)性。我們前期發(fā)現(xiàn)的APOL1位點(diǎn)突變可能從多方面影