FSGS患者血清對足細(xì)胞活性及黏附功能的影響.pdf

1、[目的]
　　 Shalhoub曾提出假說:“腎小球滲透因子”(現(xiàn)也稱之為:“血漿因子”、“FSGS因子”和“循環(huán)因子”)是導(dǎo)致腎小球發(fā)生局灶節(jié)段性硬化的致病因子。但此假說目前尚未被證實。本研究擬應(yīng)用較為直觀的體外研究方法,探討FSGS血清對足細(xì)胞活力以及黏附功能的影響,并通過分析以上體外實驗指標(biāo)與FSGS體內(nèi)足細(xì)胞丟失程度的相關(guān)關(guān)系,可望找到FSGS血清對足細(xì)胞毒性作用的直接證據(jù),為下一步清除FSGS致病因子的探索提供理論基礎(chǔ)

2、。
　　 [方法]
　　 1.提取血清:從30例未使用腎上腺皮質(zhì)激素和免疫抑制劑治療的成人原發(fā)性FSGS患者中提取血清,并從15例健康志愿者提取對照血清,所有入選患者及志愿者均常規(guī)排除乙肝、丙肝及HIV病毒感染。所獲血清56℃滅活補體,抽濾滅菌,混勻后分裝備用。
　　 2.細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定:細(xì)胞培養(yǎng)至分化2周,光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)以證實為分化成熟的MPC-5細(xì)胞。
　　 3.分別用3種濃度的FSGS患者血清(

3、5％、10%、20%)處理分化成熟的MPC-5細(xì)胞,其中5%、10%FSGS血清組分別以正常人血清補足至總血清含量為20%,于24h、48h收集細(xì)胞。
　　 4.足細(xì)胞株的鑒定,主要檢測其標(biāo)志蛋白WT-1,nephrim
　　 5.四甲基偶氮哇鹽(MTT)比色法檢測FSGS血清刺激兩種狀態(tài)下足細(xì)胞的細(xì)胞活力;
　　 6.BCA法檢測FSGS血清刺激后黏附功能尚存以及黏附功能下降的足細(xì)胞總蛋白濃度,間接反映兩類細(xì)胞

4、的數(shù)量,并計算脫落細(xì)胞所占總細(xì)胞的比例。
　　 [結(jié)果]
　　 1足細(xì)胞的標(biāo)志蛋白WT-1和nephrin均在相應(yīng)部位有表達(dá),證明實驗所用細(xì)胞株來源為足細(xì)胞,且已分化成熟。
　　 2 MTT法結(jié)果顯示,對于許可狀態(tài)的足細(xì)胞,刺激24h后,20%FSGS血清組較正常血清組對足細(xì)胞活力有顯著的抑制作用(p＜0.01),而含5%FSGS血清組與含10%FSGS組對足細(xì)胞活力無顯著抑制作用;刺激48h后,作用與刺激24小

5、時相類似,10%FSGS血清組及20%FSGS血清組顯示顯著抑制作用(p＜0.05)。
　　 3.通過對脫落細(xì)胞占總細(xì)胞的比值分析,可見刺激24h后,FSGS血清與正常血清對足細(xì)胞的黏附功能的影響無顯著差別(p＞0.05),刺激48h后,各FSGS血清組相對正常血清組對足細(xì)胞的黏附功能有顯著的影響(p＜0.05),且可能呈劑量性影響足細(xì)胞的黏附功能,提示FSGS血清可以顯著的降低足細(xì)胞的黏附功能。
　　 [結(jié)論]FSGS