載順鉑的PLGA-Fe3O4原位植入物磁熱消融聯(lián)合化療增效兔VX2腫瘤實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分、載順鉑的PLGA/Fe3O4原位植入物的制備及性能檢測目的：制備載順鉑的液固相變型PLGA/Fe3O4原位植入物(DDP/PLGA-Fe3O4)，檢測其物理學(xué)、體外磁熱及生物安全性能。
　　方法：制備 Fe3O4質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為10%，20%，30%的DDP/PLGA-Fe3O4，其中DDP質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%。在瓊脂糖凝膠模型內(nèi)超聲觀察其液固相變的過程。取不同F(xiàn)e3O4質(zhì)量分?jǐn)?shù)的DDP/PLGA-Fe3O4各50μl，置于外加

2、交變磁場內(nèi)，遠(yuǎn)紅外成像儀記錄材料隨時(shí)間的溫度變化，以此篩選最優(yōu)Fe3O4質(zhì)量分?jǐn)?shù)的DDP/PLGA-Fe3O4。對其結(jié)構(gòu)、磁熱性能進(jìn)行檢測。選取最優(yōu)Fe3O4質(zhì)量分?jǐn)?shù)的DDP/PLGA-Fe3O4浸泡于RPMI1640培養(yǎng)液中，與人卵巢癌SKOV3細(xì)胞共同孵育，觀察其對細(xì)胞活性的影響。
　　結(jié)果：DDP/PLGA-Fe3O4與水接觸后迅速發(fā)生液-固相變，超聲圖像上顯示為強(qiáng)回聲。DDP/PLGA-Fe3O4在交變磁場下升溫性能良好，

3、隨磁場作用時(shí)間的延長，溫度逐漸升高，其中Fe3O4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的DDP/PLGA-Fe3O4能夠在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到使組織發(fā)生凝固性壞死的溫度。掃描電鏡下觀察液固相變后的DDP/PLGA-Fe3O4內(nèi)部結(jié)構(gòu)疏松，呈蜂窩狀。EDS顯示Fe3O4較均勻地分布于材料中。CCK-8法測得DDP/PLGA-30%Fe3O4浸泡液對人卵巢癌SKOV3細(xì)胞活性無明顯影響。
　　結(jié)論：DDP/PLGA-Fe3O4在交變磁場作用下具有良好的升溫性

4、能，是一種生物安全性良好的新型磁熱材料。
　　第二部分、DDP/PLGA-Fe3O4體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)研究目的：研究 DDP/PLGA-Fe3O4在外加交變磁場作用下的藥物釋放特性。
　　方法：取含F(xiàn)e3O4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的DDP/PLGA-Fe3O450μl置于裝有PBS溶液(PH值為7.4)的透析袋中,再將透析袋放于離心管內(nèi)。實(shí)驗(yàn)分為三組，無交變磁場作用組，交變磁場加熱10s組及交變磁場加熱30 s組。交變磁場加熱10s

5、組及交變磁場加熱30s組分別在時(shí)間點(diǎn)2h、8h時(shí)施加外加交變磁場10s、30s。各組分別在時(shí)間點(diǎn)為30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h時(shí)取1ml釋放液，隨后補(bǔ)充1ml PBS。所有取得的釋放液均用高效液相色譜法計(jì)算DDP釋放量。
　　結(jié)果：交變磁場加熱組的累積藥物釋放率明顯高于無交變磁場加熱組。交變磁場加熱組中，在時(shí)間點(diǎn)2h及8h時(shí)，隨外加交變磁場作用時(shí)間的增加，DDP的累計(jì)釋放量也隨之增加。

6、96h后，三組DDP累積釋放率分別為44.3±3.9%，56.2±3.3%，83.5±8.7%。
　　結(jié)論：外加交變磁場可控制DDP/PLGA-Fe3O4中DDP的釋放，增加藥物釋放率。
　　第三部分、DDP/PLGA-Fe3O4磁熱消融聯(lián)合化療治療兔VX2腫瘤
　　目的：觀察DDP/PLGA-Fe3O4消融離體牛肝的效果，篩選DDP/PLGA-Fe3O4進(jìn)行體內(nèi)消融實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)劑量和消融時(shí)間；觀察DDP/PLGA-Fe

7、3O4對兔VX2移植瘤的治療效果，探討磁熱療聯(lián)合化療的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：超聲引導(dǎo)下分別注射含F(xiàn)e3O4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的DDP/PLGA-Fe3O450μl、100μl于新鮮離體牛肝內(nèi)，置于交變磁場中不同時(shí)間(1min，3min，5min)，注射100μl DDP/PLGA的牛肝作為空白對照組，計(jì)算凝固性壞死體積，評價(jià)DDP/PLGA-30%Fe3O4的消融效果。另注射含F(xiàn)e3O4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的DDP/PLGA-Fe3O4

8、100μl于離體牛肝內(nèi)，置于交變磁場內(nèi)3min后測定距離注射點(diǎn)1cm、2cm、3cm處的牛肝表面溫度。新西蘭大白兔48只，采用瘤塊種植法建立兔大腿VX2移植瘤模型。隨機(jī)分為4組(每組12只），包括空白對照組（Control）、單純化療組（DDP/PLGA）、單純磁熱組（PLGA-30%Fe3O4+AMF）、磁熱療聯(lián)合化療組（DDP/PLGA-30%Fe3O4+AMF），外加交變磁場下作用3min。治療后超聲測量腫瘤大小及觀察腫瘤血供情況

9、，繪制腫瘤體積-時(shí)間曲線。第1天每組隨機(jī)處死3只荷瘤兔，取不完全消融腫瘤組織行HE染色及免疫組化檢查HSP70表達(dá)水平，并于透射電鏡下觀察腫瘤組織超微結(jié)構(gòu)改變。第4天每組隨機(jī)處死3只荷瘤兔，取不完全消融腫瘤組織行PCNA檢測、TUNEL檢測。第1、4、7天取材料中心（距離材料0.5cm內(nèi)）和材料周圍（距離材料0.5cm外）的腫瘤組織行ICP-AES檢測腫瘤內(nèi)鉑元素含量。余荷瘤兔繼續(xù)飼養(yǎng)觀察腫瘤生長情況。
　　結(jié)果：離體牛肝組織內(nèi)注

10、射的DDP/PLGA-30%Fe3O4劑量越大，交變磁場中作用時(shí)間越長，則牛肝組織凝固性壞死體積越大。牛肝組織表面溫度會(huì)隨與注射點(diǎn)距離的增加而遞減。兔 VX2移植瘤治療實(shí)驗(yàn)中，磁熱療聯(lián)合化療組的腫瘤體積明顯減?。≒＜0.05），而單純化療組、單純磁熱療組及對照組腫瘤體積隨時(shí)間延長呈持續(xù)增大趨勢。磁熱療聯(lián)合化療組腫瘤細(xì)胞 PCNA陽性表達(dá)率明顯低于其余各組（P＜0.05），TUNEL陽性表達(dá)率明顯高于其余各組（P＜0.05）。光鏡下觀察腫

11、瘤組織HE染色，消融區(qū)腫瘤細(xì)胞凝固性壞死，壞死區(qū)與未消融腫瘤組織分界清楚。透射電鏡下觀察，腫瘤細(xì)胞膜和核膜斷裂，染色質(zhì)固縮、碎裂呈團(tuán)塊狀，或胞漿、細(xì)胞核溶解。ICP-AES顯示，鉑元素除了在材料中心的腫瘤組織內(nèi)保持較高濃度外，材料周邊的腫瘤組織內(nèi)也可檢測到較高鉑濃度，隨時(shí)間延長鉑元素濃度逐漸減低，持續(xù)至治療后第7天。單純磁熱療組及磁熱療聯(lián)合化療組中血清可溶性白介素-2受體水平低于其余兩組，在治療過程中呈下降趨勢，而其它兩組無明顯變化。<