α-硫辛酸抑制帕金森病模型細胞鐵聚積的實驗研究.pdf

1、目的：
　　運用6-羥基多巴胺（6-OHDA）體外誘導(dǎo)PC12細胞建立PD細胞模型，觀察α-硫辛酸（LA）對PD模型細胞的存活率、氧化應(yīng)激水平、鐵代謝及相關(guān)蛋白表達的影響，并進一步探討其作用機制。
　　方法:
　　PC12細胞接種于含有10％胎牛血清（FBS）的DMEM高糖培養(yǎng)基中，置于含5% CO2、37℃的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，生長24小時后的貼壁細胞用于后續(xù)實驗研究。運用MTT法確定6-OHDA的最適造模濃度，篩選L

2、A低、高保護濃度。實驗隨機分為正常對照組（無血清DMEM）、模型組（50μmol/L6-OHDA）、LA低劑量（0.001μmol/L LA預(yù)處理1h后+50μmol/L6-OHDA）組和LA高劑量（0.1μmol/LLA預(yù)處理1h后+50μmol/L6-OHDA）組。采用比色法測定各組細胞內(nèi)MDA、鐵含量；Western blot檢測鐵代謝相關(guān)蛋白DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2的表達情況；實時熒光定量PCR分析DMT1(+I

3、RE)、IRP1、IRP2的 mRNA水平。
　　結(jié)果：
　?。?）與對照組相比，模型組細胞活力明顯下降（P＜0.01），細胞內(nèi)MDA、鐵含量顯著增加（P＜0.01），DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2蛋白表達及mRNA水平均明顯上調(diào)（P＜0.01）。
　　（2）與模型組相比，LA低劑量組細胞活力上升（P＜0.01），細胞內(nèi)MDA、鐵含量均顯著減少（P＜0.01），DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2蛋白表達

4、量均有所降低（P＜0.01），DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2的mRNA水平均明顯下調(diào)（P＜0.01）。
　?。?）與模型組相比，LA高劑量組細胞活力顯著上升（P＜0.01），細胞內(nèi)MDA、鐵含量均顯著減少（P＜0.01），DMT1(+IRE)、IRP1、IRP2蛋白表達量及mRNA水平均明顯下調(diào)（P＜0.01）。
　?。?）與LA低劑量組相比，LA高劑量組細胞內(nèi)MDA、鐵含量均有所減少（P＜0.01），DMT1(+

5、IRE)、IRP1蛋白表達量均有所降低（P＜0.01），DMT1(+IRE)、IRP1的mRNA水平均顯著下調(diào)（P＜0.01）；而LA低劑量組與LA高劑量組相比，兩組的IRP2蛋白及mRNA表達差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　6-OHDA誘導(dǎo)的PD模型細胞內(nèi)含鐵量增加，IRP1、IRP2、DMT1(+IRE)的mRNA水平及其蛋白表達量均明顯升高，適合用于PD的鐵代謝研究；而LA可下調(diào)PD模型細胞的I