HeLa細(xì)胞的RNA-16在細(xì)胞周期和藥物處理下的表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、真核細(xì)胞在受到DNA損傷藥物的刺激后，細(xì)胞本身可以激活一系列的反應(yīng)機(jī)制，包括DNA修復(fù)，細(xì)胞周期的停滯和細(xì)胞凋亡等。這些反應(yīng)過(guò)程不僅有各種基因和它們的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的參與，而且也有RNA和代謝小分子的參與。MicroRNA（miRNA）是一類長(zhǎng)度為22個(gè)核苷酸左右的非編碼RNA，對(duì)動(dòng)植物細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)起著重要的調(diào)控作用。目前，一些報(bào)道稱用紫外線或者離子照射導(dǎo)致的細(xì)胞DNA損傷，其細(xì)胞內(nèi)的miRNA的表達(dá)也會(huì)發(fā)生改變，進(jìn)而影響到一個(gè)或多個(gè)靶

2、基因的表達(dá)水平。
　　 在本實(shí)驗(yàn)室前期的研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)，用甲磺酸甲酯(MMS)處理HeLa細(xì)胞，可以導(dǎo)致各個(gè)時(shí)相的細(xì)胞周期進(jìn)程發(fā)生阻滯。為了探討DNA甲基化試劑引發(fā)的DNA損傷是否可以影響miR-16的表達(dá)變化，我們首先研究了HeLa細(xì)胞在有MMS處理或者沒(méi)有MMS處理下的各個(gè)時(shí)相的細(xì)胞周期中miR-16的表達(dá)情況。我們的結(jié)果表明，只有在MMS處理的S時(shí)期的HeLa細(xì)胞中，miR-16的表達(dá)有明顯的升高。進(jìn)一步的分子機(jī)理研

3、究表明，Cdc25A蛋白也僅僅在藥物處理的S時(shí)期細(xì)胞中下調(diào)表達(dá)。
　　 為了進(jìn)一步確定miR-16和Cdc25A之間的關(guān)系，我們通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-16的抑制劑來(lái)抑制內(nèi)源性的miR-16的表達(dá)。結(jié)果表明，抑制了MMS-誘導(dǎo)的miR-16的表達(dá)上調(diào)就能夠增加Cdc25A的表達(dá)；進(jìn)一步證明miR-16的表達(dá)上調(diào)具備了下調(diào)其靶蛋白Cdc25A的功能。但是，用流式細(xì)胞儀分析的DNA含量的結(jié)果卻顯示，Cdc25A恢復(fù)性表達(dá)的MMS-處理的

4、細(xì)胞依然停滯在S期，表明僅僅是恢復(fù)因miR-16的表達(dá)上調(diào)導(dǎo)致的Cde25A蛋白表達(dá)水平，不足以消除MMS-處理引起的細(xì)胞周期停滯。
　　 上述實(shí)驗(yàn)表明miRNA的表達(dá)調(diào)控具有細(xì)胞周期時(shí)相的依賴性，那么這種調(diào)控是否具有藥物的依賴性。我們用另一種DNA損傷藥物羥基脲(HU)將HeLa細(xì)胞的S期進(jìn)行阻滯。分析結(jié)果顯示，miR-16和Cdc25A的含量在HU-處理引起的S期停滯的HeLa細(xì)胞中并沒(méi)有發(fā)生改變。
　　 這些數(shù)據(jù)表