下調(diào)APC-Cdh1對(duì)Hela細(xì)胞周期的影響.pdf

1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文下調(diào)APCCdh1對(duì)Hela細(xì)胞周期的影響姓名：柳璐申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：張傳漢20080501華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文1下調(diào)下調(diào)APCCdh1對(duì)Hela細(xì)胞周期的影響細(xì)胞周期的影響華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院麻醉學(xué)教研室碩士研究生：柳璐指導(dǎo)老師：張傳漢教授中文摘要中文摘要目的目的細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的紊亂導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)限制地增殖是惡性腫瘤發(fā)生的主要機(jī)制之一。參與細(xì)胞周期調(diào)

2、控的因子有多種，Skp2為其中一種，它作為一種新的癌基因已成為人們?nèi)找骊P(guān)注的焦點(diǎn)。Skp2也是APCCdh1的關(guān)鍵底物之一。APCCdh1雖在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮著重要作用，但下調(diào)APCCdh1是否引起增殖細(xì)胞凋亡及如何影響細(xì)胞周期，尚不確定。故本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建Cdh1小干擾RNA載體，并將其轉(zhuǎn)染至Hela細(xì)胞中，對(duì)其表達(dá)進(jìn)行鑒定，下調(diào)APCCdh1檢測(cè)相關(guān)蛋白Skp2的變化，并探討下調(diào)APCCdh1對(duì)Hela細(xì)胞周期的影響。方法方法1.Cdh

3、1小干擾RNA載體的構(gòu)建及鑒定根據(jù)pENTRTMH1TO中間載體要求，設(shè)計(jì)Cdh1小干擾RNA載體的干擾序列及無(wú)干擾作用的對(duì)照序列，合成相應(yīng)的DNA單鏈，退火后連接到pENTRTMH1TO線性載體，形成完整載體，進(jìn)行測(cè)序鑒定。分別將測(cè)序鑒定成功的Cdh1小干擾RNA載體及對(duì)照載體采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48h提取細(xì)胞總RNA及細(xì)胞總蛋白，采用實(shí)時(shí)定量PCR和Westernblot檢測(cè)Cdh1的表達(dá)。2.下調(diào)APCCdh1對(duì)H