DNA損傷試劑對HeLa細胞的細胞周期檢查點的影響.pdf

1、p53蛋白參與了細胞周期檢查點和DNA修復(fù)等多種生命活動中，在維護基因組完整性中發(fā)揮重要的作用。多種類型的腫瘤中均發(fā)現(xiàn)p53的突變，提示腫瘤細胞體系中DNA損傷檢查點的機制可能不同于正常的組織細胞。
　　 為探討在p53失活的腫瘤細胞中DNA甲基化試劑引發(fā)的DNA損傷對于細胞周期的影響，我們將同步化在G1期、S期和G2/M期的HeLa細胞分別進行甲磺酸甲酯(MMS)處理。MMS的處理結(jié)果表明，各個時相的細胞周期進程均發(fā)生延遲或阻

2、滯，其中S期細胞對藥物最為敏感。進一步分子機理研究表明，三個時相中ATM-Chk2和p38 MAPK通路均被激活，但是檢查點激酶1(Chk1)僅在S期中被活化，提示Chk1特異地參與了S期的DNA損傷檢查點(DNA damage checkpoint)或者DNA復(fù)制檢查點(DNA replication checkpoint)的作用。為了進一步確定Chk1在S期檢查點中的功能，我們用專一的小分子抑制劑抑制Chk1的磷酸化，發(fā)現(xiàn)被MMS處

3、理的S期細胞能在未完成復(fù)制的情況下進行異常的有絲分裂；提示Chk1主要是在HeLa細胞S期的DNA損傷檢查點而不是DNA復(fù)制檢查點發(fā)揮其作用。我們還檢查了參與G2/M期進程的cyclin B1的表達變化情況，在MMS處理的S期細胞中cyclin B1表達量不能上調(diào)，而在加入Chk1抑制劑處理后，cyclinB1則有所增加。這一結(jié)果進一步支持DNA損傷S期細胞在Chk1失活時進入異常有絲分裂的推論。我們的研究結(jié)果表明，Chk1是MMS誘發(fā)