HCMV感染對(duì)HEL細(xì)胞細(xì)胞周期相關(guān)因子Cdt1與Geminin表達(dá)的影響.pdf

1、目的研究人胚肺成纖維(human embryonic 1ung fibroblastic，HEL)細(xì)胞細(xì)胞周期相關(guān)因子Cdt1與Geminin的表達(dá)狀態(tài)及人類(lèi)巨細(xì)胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)感染對(duì)兩者表達(dá)的影響，探討HCMV’感染可能的發(fā)病機(jī)制。 方法用血清饑餓法同步化HEL細(xì)胞于G<,0>/G<,1>期，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期；用HCMV感染同步化的HEL細(xì)胞作為感染組，同時(shí)設(shè)模擬感染組為對(duì)照組

2、。用倒置相差顯微鏡觀察兩組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化至感染后168小時(shí)。于感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收獲細(xì)胞，提取總的RNA，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)Cdtl-mRNA和Geminin-mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果 1、模擬感染組未見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，感染組感染后36h即可見(jiàn)局部細(xì)胞變圓、膨脹，胞體及胞核巨大化，168h時(shí)可見(jiàn)所有細(xì)胞均發(fā)生病變。 2、分別用含0.5﹪，

3、1﹪，2﹪和10﹪新生牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)HEL細(xì)胞，48小時(shí)后收獲細(xì)胞，結(jié)果顯示處于G<,0>/G<,1>期的HEL細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)分別為82.8﹪，78.4﹪，69.9﹪，43.8﹪。新生牛血清濃度為0.5﹪時(shí)，細(xì)胞同步化較理想，所同步化的HEL細(xì)胞可用于試驗(yàn)。 3、12h、24h、48h和72h兩組HEL細(xì)胞Cdtl-mRNA表達(dá)水平均有顯著性差異(P<0.05)，12h和24h感染組較模擬感染組明顯降低，48h和72

4、h時(shí)感染組較模擬感染組明顯升高。將其制成時(shí)間與Cdtl-mRNA表達(dá)水平線圖顯示，模擬感染組在感染后12h時(shí)Cdtl-mRNA表達(dá)水平最高，感染組在感染后48h達(dá)最高峰。 4、12h、24h、48h和72h兩組HEL細(xì)胞Geminin-mRNA表達(dá)水平均有顯著性差異(P<0.05)，12h和24h感染組較模擬感染組明顯增加，48h和72h時(shí)模擬感染組較感染組明顯升高。將其制成時(shí)間與Geminin-mRNA表達(dá)水平線圖顯示，感染組