Cdt1和Geminin在HL-60細(xì)胞和K562細(xì)胞中的表達(dá)及相關(guān)研究.pdf

1、目的為探討細(xì)胞復(fù)制允許因子Cdtl和復(fù)制抑制因子Geminin在白血病細(xì)胞中的表達(dá)及其與細(xì)胞增殖的關(guān)系。為白血病的發(fā)病機(jī)制、診斷治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。 方法培養(yǎng)白血病細(xì)胞系HL-60和K562，并以阿糖胞苷(Ara-C)進(jìn)行藥物干預(yù)，觀察細(xì)胞生長曲線，通過MTT、比色法檢測藥物干預(yù)的細(xì)胞抑制率。 實(shí)驗分為兩個部分：(1)HL-60細(xì)胞部分，分5組：處于對數(shù)生長期的HL-60細(xì)胞(A組)；處于饑餓狀態(tài)的非對數(shù)生長期的HL

2、-60細(xì)胞(B組);Ara—C藥物干預(yù)的HL-60細(xì)胞(C組)；以正常人外周血粒細(xì)胞(D組)和淋巴細(xì)胞(E組)作對照組。(2)K562細(xì)胞部分，分5組：處于對數(shù)生長期的K562細(xì)胞(A組)；處于饑餓狀態(tài)的非對數(shù)生長期的K562細(xì)胞(B組)；Ara-C藥物干預(yù)的K562細(xì)胞(C組)；以正常人外周血粒細(xì)胞(D組)和淋巴細(xì)胞(E組)作對照組。收集各組細(xì)胞，利用RT-PCR方法檢測細(xì)胞中Cdtl和Geminin mRNA的表達(dá)，進(jìn)行半定量分析；

3、利用免疫組織細(xì)胞化學(xué)方法檢測細(xì)胞中的Cdtl和Geminin蛋白的表達(dá)，對細(xì)胞陽性表達(dá)率進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果①正常人外周血淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞中僅有少量Cdtl蛋白和Geminin蛋白表達(dá)，但無明顯Cdt1 mRNA和Geminin mRNA表達(dá)。②處于對數(shù)生長期的K562細(xì)胞和HL一60細(xì)胞Cdtl mRNA及蛋白的表達(dá)、GemininmRNA及蛋白的表達(dá)均顯著高于對照組(P<0.05)。③處于饑餓狀態(tài)的K562細(xì)胞和HL一60

4、細(xì)胞Cdtl mRNA及蛋白的表達(dá)、Geminin mRNA及蛋白的表達(dá)均較對數(shù)生長期細(xì)胞顯著降低(P<005)。④Ara一C藥物干預(yù)的K562細(xì)胞和HL一60細(xì)胞Cdt1 mRNA及蛋白、Geminin mRNA及蛋白表達(dá)較對數(shù)生長期細(xì)胞顯著降低(p<0.05)。 結(jié)論①白血病細(xì)胞系HL-60和K562在對數(shù)生長期，Cdt1的表達(dá)在基因水平和蛋白質(zhì)水平顯著增高；②采用血清饑餓的方法抑制細(xì)胞增殖或Ara-C藥物干預(yù)可使白血病細(xì)胞