HCMV感染對(duì)HEL細(xì)胞周期與MCM2、MCM8表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究人類(lèi)巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染對(duì)HEL細(xì)胞周期、MCM2和MCM8表達(dá)的影響，探討HCMV感染可能的發(fā)病機(jī)制。 方法：用HCMV感染血清饑餓法同步化的人胚肺成纖維細(xì)胞(human embryonic lung fibroblastic，HEL)。HCMV感染作為感染組，同時(shí)設(shè)非感染組為對(duì)照組，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。用倒置相差顯微鏡觀察兩組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變至感染后7天。于HC

2、MV感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收獲細(xì)胞，提取總RNA，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)HEL細(xì)胞MCM2和MCM8的表達(dá)水平。 結(jié)果 1、非感染組未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。感染組感染HCMV 48h后，可見(jiàn)細(xì)胞變形顯著，部分梭形細(xì)胞變成突起豐富的單個(gè)球形細(xì)胞，72h后病變更加明顯，細(xì)胞絕大部分變成圓形、橢圓形，胞體及胞核增大，胞質(zhì)混濁，細(xì)胞透光性降低。7天時(shí)可見(jiàn)所有感染細(xì)胞

3、均發(fā)生類(lèi)似病變。 2、感染組在感染后12h有71.4﹪的HEL細(xì)胞處于G<,1>期，24h仍有70.2﹪的細(xì)胞處于G<,1>期。非感染組在感染后12h有63.5﹪的HEL細(xì)胞處于G1期，24h有45.5﹪的細(xì)胞處于G<,1>期。兩組比較，均有顯著性差異(P<0.01)。 3、12h、24h、48h、72h、96h兩組細(xì)胞MCM2和MCM8 mRNA表達(dá)水平均有顯著性差異(P<0.05)，12h和24h時(shí)感染組表達(dá)水平低于

4、非感染組，48h、72h、96h時(shí)感染組表達(dá)水平明顯高于非感染組。在上述5個(gè)時(shí)間點(diǎn)中，非感染組MCM2、MCM8 mRNA表達(dá)水平的高峰出現(xiàn)在感染后24h，而感染組表達(dá)水平的高峰則出現(xiàn)在感染后48h，較之有明顯滯后。 結(jié)論： 1、HCMV感染影響了HEL細(xì)胞周期，大部分HEL細(xì)胞停滯在G<,1>期。 2、HCMV感染能誘導(dǎo)MCM2及MCM8 mRNA表達(dá)異常，使HEL細(xì)胞MCM2及MCM8 mRNA表達(dá)水平遲滯，這可能是