齊墩果酸抑制HMGB1-TLR4-中性粒細(xì)胞正反饋環(huán)減輕小鼠肝缺血再灌注損傷.pdf

1、目的：
　　探討齊墩果酸（ oleanolic acid， OA）對(duì)小鼠肝缺血（ ischemia-reperfusion，IR）再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：
　　將Balb/c雄性小鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)對(duì)照組（Control組）、齊墩果酸對(duì)照組（OA組）、肝缺血再灌注模型組（IR組）和齊墩果酸干預(yù)組（OA+IR組）。肝缺血再灌注模型組（IR組）干預(yù)方式：小鼠麻醉好后，沿著腹白線剖開(kāi)，暴露門(mén)脈三聯(lián)管（小

2、葉間動(dòng)脈、小葉間靜脈和小葉間膽管）用無(wú)創(chuàng)小號(hào)血管夾將其夾閉，使70％的肝臟缺血3 h再灌注6 h。齊墩果酸的給藥劑量為100 mg/kg，給藥方式為灌胃3次，每次間隔8 h（最后一次灌胃在術(shù)前半小時(shí)）。小鼠肝臟再灌注6 h后獲得血清，檢測(cè)其丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）活性水平；取缺血再灌注肝葉（中葉或者左葉）做石蠟切片后再

3、用蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，觀察肝臟組織病理變化；原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)TUNEL（ transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling）和蛋白印記法（Western blot）檢測(cè)有關(guān)調(diào)控凋亡的信號(hào)分子Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、cleaved caspase-7和cleaved caspase

4、-9評(píng)價(jià)肝臟組織的壞死程度和細(xì)胞凋亡情況。免疫組織化學(xué)（ immunohistochemistry， IHC）定性檢測(cè)高遷移率族蛋白B1（ high mobility group box-1 protein，HMGB1）的表達(dá)情況；實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（quantitative reverse transcription PCR, qRT-PCR）檢測(cè)toll樣受體4（ toll like receptor4， TLR4）、腫瘤壞死因子

5、-?（ tumor necrosis factor-alpha，TNF-?）和白細(xì)胞介素-1?（interleukin-1beta，IL-1?）mRNA的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）檢測(cè)血清中TNF-??和IL-1?的表達(dá)；Western blot分析肝臟組織中磷酸化的絲裂原活化蛋白酶（ mitogen-activated protein kinases，

6、MAPKs)：磷酸化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase， p-ERK）、磷酸化的 p-c-Jun氨基末端激酶（ phosphorylated c-Jun N-terminal kinase， p-JNK）和磷酸化的 p-38（p-p38）蛋白水平的變化；流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）分析中性粒細(xì)胞募集程度。
　　結(jié)果：<

7、br>　　OA+IR組與IR組相比，OA預(yù)處理后，血清中ALT和AST的活性水平顯著降低，肝臟組織病理?yè)p傷程度減小以及凋亡細(xì)胞明顯減少，由核內(nèi)釋放到細(xì)胞外的HMGB1極大地減少，TLR4和磷酸化的MAPKs蛋白表達(dá)水平均明顯下調(diào)，TNF-?和IL-1?的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低，中性粒細(xì)胞的募集極大地減少。
　　結(jié)論：
　　齊墩果酸對(duì)小鼠肝缺血再灌注誘導(dǎo)的損傷具有保護(hù)作用。其保護(hù)作用機(jī)制可能與抑制HMGB1-TLR4-