Sry核酸疫苗作用途徑初探.pdf

1、核酸疫苗是由抗原編碼基因和真核表達載體構建的重組質粒,將其導入機體后可誘導機體全面的免疫應答。與傳統(tǒng)的蛋白免疫相比具有制作簡單、經(jīng)濟安全、易于貯存運輸?shù)葍?yōu)點,自發(fā)現(xiàn)以來已越來越引起人們的重視,成為第三代疫苗,被廣泛用于各種感染性疾病的防治研究中,我們實驗室將核酸疫苗引入了性別控制領域。 在性別決定和性別分化過程中,SRY/Sry基因是公認的哺乳動物性別決定基因。研究表明,基因正常表達個體就發(fā)育成雄性；相反,如果基因缺失或突變個體

2、就發(fā)育成雌性。小鼠的性別決定發(fā)生在10.5～12.5 dpc,Sty基因也僅在此時表達。所以,性別控制可以圍繞著SRY/Sry基因展開。 我們實驗室已經(jīng)通過對小鼠進行肌肉注射Sty核酸疫苗的方法初步實現(xiàn)了XY胚胎向雌性反轉的性別控制,獲得了XY雌性個體。本實驗就Sry核酸疫苗的作用途徑進行了初步探索,以便對此疫苗進行更深入的研究。 實驗中,首先檢測了核酸疫苗的體外、體內(nèi)表達情況。在體外實驗中,將pCR3.1-Sry瞬時轉

3、染HeLa細胞,分別用RT-PCR和間接免疫熒光法檢測質粒在細胞中的表達；體內(nèi)實驗中,用pCR3.1-Sry肌肉注射小鼠,一周后分別提取小鼠肝臟、脾臟、肌肉、子宮組織的RNA,RT-PCR的方法檢測質粒在這些組織處的表達；其次,對小鼠進行肌肉注射pCR3.1-Sry,隔一周后進行二免,二免后一周眼眶取血制備抗血清；構建pET2lb-Sry重組質粒并原核表達Sry蛋白做為抗原,用夾心法ELISA對獲得的抗血清進行檢測。結果表明：不管在體內(nèi)