TSH改變亞臨床甲減小鼠胸腺中T細胞發(fā)育及TSH在免疫系統(tǒng)中的作用.pdf

1、研究背景:
　　促甲狀腺素(thyrotropin，TSH)被認為僅僅甲狀腺調節(jié)。然而，新的證據(jù)表明，高血清TSH水平可能存在潛在的有害的影響。高血清TSH水平，是非酒精性脂肪肝病和心血管疾病的獨立危險因素，而且往往伴隨著慢性炎癥、胰島素抵抗、氧化應激。亞臨床甲狀腺功能減退癥(subclinical hypothyroidism，SCH)，是一種臨床上較為常見的隱匿性疾病，其特點是甲狀腺功能血清學檢測表現(xiàn)為促甲狀腺激素水平增高，但

2、游離甲狀腺素水平尚正常，是甲狀腺機能減退障礙的早期階段。亞甲減癥的發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，并對健康有潛在的害影響。SCH在成年人中的患病率約為4-10％。
　　胸腺是重要的中樞免疫器官，是T淋巴細胞離開骨髓后發(fā)育的重要場所。胸腺為T淋巴細胞的發(fā)育，提供了一個特定的微環(huán)境，既胸腺微環(huán)境。對胸腺內T細胞發(fā)育、分化以及成熟的研究，是當今免疫學研究的重要熱門領域。研究表明，T細胞表達促甲狀腺激素受體(TSH receptor，TSH-R

3、)，而SCH中胸腺T細胞發(fā)育的變化尚未完全闡明。
　　研究目的:
　　本實驗旨在闡明亞甲減小鼠模型中，TSH對胸腺T細胞發(fā)育的影響，SCH小鼠模型中胸腺的細胞組成情況以及不同發(fā)育階段的T細胞凋亡變化。
　　研究方法:
　　1.SCH小鼠模型的構建:應用甲巰基咪唑喂養(yǎng)小鼠，甲巰基咪唑劑量為0.08mg/kg/d，甲巰基咪唑喂養(yǎng)16周時，采用I125標記放射免疫的方法，檢測小鼠的血清中游離甲狀腺素(FT4)水平，采取

4、Elisa的方法測驗小鼠血清TSH水平。通過評估小鼠的血清甲狀腺功能，來構建SCH小鼠模型，使其血清檢測符合SCH診斷標準，既血清TSH水平升高，甲狀腺激素水平無顯著變化的，研究TSH對T細胞發(fā)育的影響。2.SCH小鼠胸腺中不同發(fā)育階段T的免疫學組成分析:應用多色彩流式分析的方法檢測小鼠胸腺中T細胞不同發(fā)育階段各T細胞亞群的比例。3.胸腺中不同發(fā)育階段T細胞凋亡比例的測定:應用凋亡試劑盒檢測各T細胞亞群細胞凋亡的比例。4.小鼠胸腺內凋亡

5、相關蛋白檢測:采取WesternBlot法測驗胸腺p-ERK/ ERK的蛋白水平變化。5.胸腺近期輸出功能檢測:提取小鼠脾臟DNA，實時定量PCR檢測小鼠脾臟T細胞DNA中TREC水平。
　　結果:
　　1.SCH小鼠模型的構建:甲巰基咪唑喂養(yǎng)小鼠16周，SCH組小鼠血清FT4測值與對照組小鼠相比，無明顯差異性的變化(P＞0.05);SCH模型組血清TSH水平明顯高于對照組小鼠(P＜0.05)，兩組血清TSH水平差異具有統(tǒng)計

6、學意義。2.SCH小鼠胸腺中不同發(fā)育階段T的免疫學組成分析:SCH小鼠胸腺重量比對照組增加18％。胸腺中CD4+和CD8+單陽性(single positive，SP)胸腺細胞分別增加了38％和44％。3.胸腺中不同發(fā)育階段T細胞凋亡比例的測定:通過檢測凋亡，我們發(fā)現(xiàn)在SCH小鼠胸腺中，Annexin-Ⅴ+細胞比例減少(p＜0.05)，證明TSH減少SCH小鼠胸腺T細胞凋亡。4.小鼠胸腺內凋亡相關蛋白檢測:Western blot結果顯