γδT細胞在皮膚移植免疫排斥反應中的作用及機理初探.pdf

1、背景：
　　異體皮膚移植以后引發(fā)的強烈免疫排斥反應是阻礙大面積燒傷患者創(chuàng)面修復的關鍵問題。經典免疫學觀點認為，LCs是在異體皮膚移植免疫排斥反應中起核心作用的免疫細胞。但通過LCs敲除小鼠皮膚移植模型發(fā)現(xiàn)，與供受體都是野生型小鼠的皮膚移植相比，供體、受體以及供受體都缺乏LCs的小鼠之間的皮膚移植，移植物存活時間并沒有顯著延長。提示在皮膚移植免疫排斥反應中還存在其它細胞參與。而另外一種重要的構成皮膚組織免疫微環(huán)境的細胞是γδ T細胞

2、，其在腫瘤、感染、創(chuàng)面愈合、自身免疫性疾病等發(fā)揮重要作用。我們前期預實驗也通過小鼠皮膚移植模型發(fā)現(xiàn)，對比野生型小鼠的皮膚移植物，TCRδ基因敲除小鼠的皮膚移植物存活時間明顯延長，提示γδ T細胞可能在異體皮膚移植免疫排斥反應中起重要作用，且γδ T細胞是皮膚組織中分泌細胞因子的重要來源。而可能參與皮膚排斥反應的有著不同功能的γδT細胞亞群包括:1.分布于表皮組織中的Vγ3 T細胞即樹突狀表皮T細胞(DendriticEpidermal

3、T Cells，DETCs);2.分布于真皮組織中的Vγ4 T細胞;3.分布于外周循環(huán)的Vγ4 T細胞。究竟是誰在皮膚移植免疫排斥反應中起重要作用、如何發(fā)揮作用以及具體作用機制迄今尚不清楚，闡明這些問題，不僅能夠使我們進一步了解皮膚移植免疫排斥反應的特殊性，而且可以作為傳統(tǒng)移植排斥反應的有益補充，并為臨床控制皮膚免疫排斥反應提供新的細胞分子靶點。
　　目的：
　　本研究擬探討γδ T各亞群是否參與異體皮膚移植免疫排斥反應以及

4、相應機制。
　　方法：
　　1、通過建立同系MHC分子微小差異的不同性別小鼠（雄-雌）之間的皮膚移植模型，比較野生型組、TCRδ-/-組移植皮片存活時間。
　　2、通過免疫熒光的方法觀察DETCs的一般形態(tài);流式細胞技術分析DETCs的表型及細胞因子的表達情況;通過將DETCs和na(i)ve CD4+T細胞體外進行共培養(yǎng)，觀察DETCs對na(i)ve CD4+T細胞分化方向的影響。
　　3、通過建立小鼠皮膚移

5、植模型，比較野生型組和Vγ4清除組移植皮片存活時間。并在移植后第5天，取野生型組移植皮片分離表皮細胞作為實驗組，同體正常表皮作為對照組，流式細胞術分析Vγ4 T細胞的浸潤情況，Western blot檢測移植皮片表皮組織中IL-17、IL-23、IL1β的表達情況。
　　結果：
　　1、TCRδ-/-組皮膚移植物存活時間較野生型組皮膚移植物存活時間顯著延長。皮膚移植物平均生存時間(MST)(TCRδ-/-組vs野生型組:22

6、.30天vs10.60天P＜0.001)。
　　2、共聚焦顯微鏡下觀察DETCs的形態(tài)，呈APC的樹突狀細胞的特征，活化后分泌一定水平的IFN-γ和IL-17A，體外與na(i)ve CD4+T細胞進行共培養(yǎng)可以誘導后者向Th1方向分化。
　　3、Vγ4清除組皮膚移植物較野生型組皮膚移植物存活時間顯著延長。皮膚移植物平均生存時間(MST)（TCRδ-/-組vs野生型組:49.08天vs11.00天P＜0.001）。
　

7、　4、野生型小鼠移植后第5天，皮膚移植物表皮組織較正常表皮浸潤Vγ4 T細胞數(shù)量明顯增加，由0.86％增加到6.08％，而DETCs比例顯著下降，由2.38％下降到0.78％。移植物表皮組織中IL-17、IL-23、IL1β的表達較正常表皮顯著增強(P＜0.05)。
　　結論：
　　本研究初步證實γδ T細胞參與并加速了皮膚移植排斥反應的發(fā)生發(fā)展過程，而不同亞型的γδ T細胞在其中發(fā)揮的作用有所不同。Vγ3γδ T細胞（即D