基于體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分析鐵皮石斛水提物對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用.pdf

1、據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，在2012年有17,500,000人死于心血管疾病。在心血管疾病中，缺血性心臟病，是全球范圍內(nèi)引起致殘和致死的主要原因。近年來(lái)我國(guó)人口趨于老齡化，同時(shí)每年冠心病等心血管疾病的發(fā)生率也在增加,嚴(yán)重威脅著人民的身心健康。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，心血瘀滯致使心脈失養(yǎng)，不通則痛，從而引起“胸痹”，其特點(diǎn)與西醫(yī)學(xué)的冠心病、心絞痛基本一致。而中藥在胸痹的治療方面具有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，悠久的歷史和重要的地位。與化學(xué)合成藥相比，中藥最大的特點(diǎn)是注

2、重整體概念，療效安全、毒副作用小，無(wú)耐受性且可長(zhǎng)期應(yīng)用。因此，尋找更安全有效的藥物，具有理論意義和臨床價(jià)值，并且是中醫(yī)藥界需要解決的。
　　中醫(yī)藥古籍中記載石斛有“補(bǔ)五臟虛勞贏瘦”的功效，同時(shí)現(xiàn)代研究表明其他石斛屬有抗血小板凝集作用，并且初步研究證明鐵皮石斛對(duì)高血壓和動(dòng)脈粥樣硬化有治療作用，但是作用機(jī)制有待深入研究，因此，我們?cè)噲D通過(guò)體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究鐵皮石斛對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用及可能的機(jī)制。
　　在體外實(shí)驗(yàn)中，以H9C2心

3、肌細(xì)胞為模型，采用過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激模型。取對(duì)數(shù)期細(xì)胞分為5組：空白對(duì)照組，H2O2模型組，H2O2+鐵皮石斛水提物(0.1，0.2，0.4mg/mL)組，研究鐵皮石斛水提物對(duì)H2O2誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用。通過(guò)噻唑藍(lán)(MTT)實(shí)驗(yàn)測(cè)定心肌細(xì)胞的存活率,MTT結(jié)果為H2O2處理組心肌細(xì)胞存活率為59.4±1.8％，鐵皮石斛多糖(0.1，0.2，0.4mg/mL)組心肌細(xì)胞存活率分別為6

4、9.7±1.8%，77.5±1.3%，83.7±1.6%，說(shuō)明鐵皮石斛預(yù)處理能夠增加H2O2處理的心肌細(xì)胞存活率，并且呈劑量依賴性。經(jīng)過(guò)AO染色后用熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛能夠減少H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的凋亡。鐵皮石斛能夠增加氧化應(yīng)激模型中SOD的含量，降低MDA的含量，表明鐵皮石斛可以增強(qiáng)心肌細(xì)胞的抗氧化性能。通過(guò)測(cè)定細(xì)胞線粒體膜電位(MMP)可知，鐵皮石斛可增強(qiáng)線粒體膜電位的強(qiáng)度，說(shuō)明鐵皮石斛能改善線粒體功能。除此之外，我們測(cè)定

5、鐵皮石斛對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS的影響，通過(guò)熒光顯微鏡對(duì)對(duì)照組、模型組和給藥組比較觀察后發(fā)現(xiàn)，模型組細(xì)胞亮度明顯亮于其他組，說(shuō)明鐵皮石斛預(yù)處理能夠有效降低H2O2誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)證明鐵皮石斛能對(duì)抗H2O2誘導(dǎo)的H9C2的毒性作用，也證明了鐵皮石斛的抗氧化性能。
　　在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，采用結(jié)扎小鼠左冠狀動(dòng)脈前降支的方法建立小鼠心肌缺血模型。將小鼠隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組（Sham組），模型組（Model組），鐵皮石斛低中高劑量(

6、75mg/kg，150mg/kg，300mg/kg)組，連續(xù)給藥14天，給藥結(jié)束后，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈。結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈后，測(cè)定小鼠心電圖ST段的變化，結(jié)果表明，與模型組相比，鐵皮石斛水提物預(yù)處理能明顯抑制ST段抬高。通過(guò)測(cè)定心肌梗死面積和組織病理學(xué)變化，評(píng)價(jià)心肌損傷的程度。TTC結(jié)果顯示，鐵皮石斛可降低心肌梗死面積，減輕心臟的氧化損傷。HE染色結(jié)果顯示，鐵皮石斛給藥組小鼠心肌組織細(xì)胞排列整齊，炎細(xì)胞減少，細(xì)胞變性較少。此外通過(guò)TUNEL法測(cè)

7、定細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示鐵皮石斛水提物能夠抑制心肌細(xì)胞的凋亡。利用蛋白免疫印跡(Western blotting)法分析鐵皮石斛對(duì)心肌組織中Meis1蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果顯示鐵皮石斛可上調(diào)受損心肌中Meis1的含量，說(shuō)明抵抗凋亡和上調(diào) Meis1表達(dá)可能是鐵皮石斛發(fā)揮心肌保護(hù)作用的作用機(jī)制。
　　通過(guò)體外和體內(nèi)研究結(jié)果顯示，鐵皮石斛水提物能夠?qū)剐募∪毖獙?dǎo)致的心肌損傷，可能成為臨床治療改善和預(yù)防心肌損傷的候選藥物。其作用機(jī)制可能為對(duì)抗

8、氧化應(yīng)激、抵抗心肌細(xì)胞凋亡和上調(diào)Meis1蛋白含量，因此我們推測(cè)鐵皮石斛通過(guò)多向調(diào)節(jié)發(fā)揮心肌保護(hù)作用。這種發(fā)現(xiàn)對(duì)心肌缺血患者是有利的，但是目前研究還不全面，更深入的鐵皮石斛發(fā)揮心肌保護(hù)作用的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。中藥以其多靶點(diǎn)的特點(diǎn)在心血管藥物研究中逐步得到科研工作者的重視，并且中藥的治病機(jī)制相輔相成互相影響，并不是獨(dú)立的作用于某一種機(jī)制，對(duì)很多發(fā)病環(huán)節(jié)都有干預(yù)作用，具有多靶點(diǎn)、多向調(diào)節(jié)、防治結(jié)合的特點(diǎn)。近年來(lái)，鐵皮石斛栽培得到規(guī)范化