鹽酸普萘洛爾脂質(zhì)體凝膠的制備與組織分布研究.pdf

1、嬰幼兒血管瘤(infantile hemangioma，IH)是一種在嬰兒身上非常常見(jiàn)的良性腫瘤，其發(fā)病率大約在4％～5％，臨床病理學(xué)表明，血管瘤主要是由于新生兒的非正常內(nèi)皮細(xì)胞增殖產(chǎn)生。2008年，法國(guó)醫(yī)生Léauté-Labrèze C偶然發(fā)現(xiàn)口服鹽酸普萘洛爾(propranololhydrochloride，PRO)治療嬰幼兒血管瘤療效顯著。其他相關(guān)報(bào)道發(fā)現(xiàn)，PRO在治療一些重癥嬰幼兒血管瘤甚至危及到嬰幼兒生命的血管瘤療效特別顯著

2、，有望治療血管瘤的一線(xiàn)用藥。
　　但口服PRO也存在一定的缺陷。首先，臨床上給藥劑量為0.5～3mg/kg/day，分2～3次口服，而一片藥物含藥10mg，這就造成一片藥物要分割成多次服用，很容易導(dǎo)致分割不均勻，進(jìn)而產(chǎn)生給藥劑量的差異。其次由于PRO具有較強(qiáng)的首過(guò)效應(yīng)，其口服生物利用度只有30％，生物半衰期只有3～4h，需要多次給藥，這就可能會(huì)使嬰幼兒嗜睡、坐立不安、呼吸困難、皮膚冰冷、食欲下降等不良反應(yīng)。此外患者主要是幾個(gè)月的嬰

3、幼兒，片劑口服給藥很不方便，病人順應(yīng)性差。為了克服臨床應(yīng)用中口服PRO產(chǎn)生的缺陷，我們采用改變藥物的給藥途徑來(lái)達(dá)到提高藥物的療效、降低藥物對(duì)其他器官的毒副作用以及增加患者的順應(yīng)性的目的。
　　本課題以PRO為模型藥物，磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)與膽固醇(cholesterol，CHOL)為主要載體材料采用薄膜分散法，制備了PRO脂質(zhì)體，再將脂質(zhì)體與2％卡波姆934混合，制備成脂質(zhì)體凝膠，

4、用于經(jīng)皮給藥:既能提高藥物在皮膚的含量從而降低藥物對(duì)其他器官的毒副作用還可以增加患者的順應(yīng)性。課題主要研究方法和結(jié)果如下:
　　1.PRO脂質(zhì)體的制備與性質(zhì)考察
　　采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)法來(lái)測(cè)定PRO的含量。選用薄膜分散法制備PRO脂質(zhì)體，在單因素考察的基礎(chǔ)上，采用正交設(shè)計(jì)篩選出最優(yōu)的處方及最佳制備工藝，對(duì)優(yōu)化好的脂質(zhì)體的理化性質(zhì)進(jìn)行了考察

5、。通過(guò)透射電鏡(transmission electron microscope，TEM)觀察脂質(zhì)體的微觀形態(tài);采用激光散射粒度儀測(cè)定其粒徑大小、分布和Zeta電勢(shì);高效液相色譜法測(cè)定包封率、載藥量。結(jié)果表明HPLC法來(lái)測(cè)定PRO的含量，專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性及靈敏性好;制備的脂質(zhì)體成球狀，表面光滑無(wú)粘連;粒徑為237.6±0.3nm，多分散系數(shù)為0.234±0.014，Zeta電勢(shì)為-26.82±0.38mV;包封率為42.01±1.10％

6、，載藥量為12.60±0.33％。
　　2.PRO脂質(zhì)體凝膠的制備與性質(zhì)考察
　　將制備好的脂質(zhì)體與2％的卡波姆混合，用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH7.0～8.0，制備成PRO脂質(zhì)體凝膠。通過(guò)掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）觀察脂質(zhì)體在凝膠中的形態(tài)，通過(guò)離心實(shí)驗(yàn)、光照及溫度實(shí)驗(yàn)考察影響其穩(wěn)定性的因素，通過(guò)流變學(xué)實(shí)驗(yàn)考察制劑的流變學(xué)特性。SEM表明脂質(zhì)體分散于凝膠表面，外觀呈現(xiàn)圓球狀。穩(wěn)定

7、性因素考察表明PRO脂質(zhì)體凝膠在離心、光照及溫度實(shí)驗(yàn)中外觀與藥物含量無(wú)顯著性差異。流變學(xué)實(shí)驗(yàn)表明所制備脂質(zhì)體凝膠具有很好的粘附性，低溫、避光的條件下保存時(shí)粘度不會(huì)發(fā)生明顯變化。
　　3.PRO脂質(zhì)體凝膠的皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)
　　研究PRO脂質(zhì)體凝膠對(duì)新西蘭兔正常皮膚與破損皮膚在一次給藥與多次給藥以后的皮膚刺激性，結(jié)果顯示PRO脂質(zhì)體凝膠對(duì)皮膚無(wú)刺激性，從而提高了患者的順應(yīng)性。
　　4.PRO脂質(zhì)體凝膠的離體透皮實(shí)驗(yàn)

8、　　采用Franz擴(kuò)散池，以PRO凝膠為對(duì)照，考察PRO脂質(zhì)體凝膠在離體小鼠皮膚的透皮能力，結(jié)果表明PRO脂質(zhì)體凝膠與PRO凝膠的穩(wěn)態(tài)滲透速率分別為7.43±0.12μg/(cm2·h)、5.62±0.15μg/(cm2·h)。
　　5.PRO脂質(zhì)體凝膠的在體實(shí)驗(yàn)
　　采用HPLC法測(cè)定小鼠皮膚中PRO的濃度。以PRO凝膠為對(duì)照，考察PRO脂質(zhì)體凝膠給藥后藥物在活體小鼠皮膚滯留量。結(jié)果表明HPLC法來(lái)測(cè)定PRO的含量，專(zhuān)屬性

9、強(qiáng)、重現(xiàn)性及靈敏性好。PRO脂質(zhì)體凝膠經(jīng)皮給藥以后在皮膚的含量明顯高于PRO凝膠作用的皮膚中藥物含量，在24h時(shí)前者為后者的兩倍。
　　6.PRO脂質(zhì)體凝膠的組織病理學(xué)研究
　　以空白皮膚為對(duì)照，通過(guò)對(duì)PRO脂質(zhì)體凝膠與PRO凝膠經(jīng)皮給藥24h后的皮膚進(jìn)行病理學(xué)研究，考察PRO脂質(zhì)體凝膠的作用機(jī)制。結(jié)果表明正常皮膚的角質(zhì)層細(xì)胞與棘層中棘細(xì)胞排列緊密，角質(zhì)層較厚，而經(jīng)PRO脂質(zhì)體凝膠與PRO凝膠作用后，皮膚的角質(zhì)層細(xì)胞與棘細(xì)胞

10、排列松散，細(xì)胞間空隙變大，尤其是經(jīng)PRO脂質(zhì)體凝膠作用后，皮膚角質(zhì)層的厚度明顯變?nèi)?，且在皮膚周邊可見(jiàn)游離的角質(zhì)層。
　　7.PRO脂質(zhì)體凝膠經(jīng)皮給藥在小鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)與組織分布研究
　　采用HPLC法測(cè)定小鼠血漿及各組織中PRO的濃度。以PRO混懸液口服給藥為對(duì)照，對(duì)制備的PRO脂質(zhì)體凝膠進(jìn)行體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)以及組織分布研究。結(jié)果表明HPLC法來(lái)測(cè)定PRO的含量，專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性及靈敏性好，滿(mǎn)足生物樣品的測(cè)定要求。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PRO

11、脂質(zhì)體凝膠經(jīng)皮給藥血漿中后cmax為0.41±0.04μg/mL，tmax為6.50h，AUC0-t為1.72±0.17μg/h/mL，口服給藥后的cmax為1.17±0.13μg/mL，tmax為1.25h，AUC0-t為2.67±0.23μg/h/mL，說(shuō)明經(jīng)皮給藥后藥物進(jìn)入血液循環(huán)的藥量較少。藥物在心、肝、脾、肺、腎、皮膚中的相對(duì)攝取率(relative uptake efficiency，re)分別為0.74、0.27、0.95