瓦氏雅羅魚遺傳多樣性分析和耐鹽堿cDNA消減文庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、瓦氏雅羅魚(Leuciscus waleckii(Dybowski))隸屬硬骨綱(Osteichthyes)、鯉形目(Cypriniformes)、鯉科(Cyprinidae)、雅羅魚屬(Leuciscus)。廣泛分布于歐洲、黑龍江流域的冷水流域。在我國(guó)分布于黑龍江、烏蘇里江、嫩江、松花江、牡丹江以及其支流、湖泊、水庫(kù)，也產(chǎn)于圖們江、鴨綠江、遼河等水域。在黃河流域的陜西、甘肅、青海、寧夏等省區(qū)也有分布。在內(nèi)蒙古自治區(qū)除額濟(jì)納河水系以外，

2、各大水系均有分布。達(dá)里湖數(shù)量最多，且是該湖的主要經(jīng)濟(jì)魚類。瓦氏雅羅魚適應(yīng)能力強(qiáng)，能在pH9.0以上的堿性水域中生活。
　　 本研究以瓦氏雅羅魚不同群體(達(dá)里湖，松花江，烏蘇里江，)為研究對(duì)象，從生理學(xué)、微衛(wèi)星標(biāo)記方面著手研究其遺傳多樣性；利用抑制消減雜交技術(shù)構(gòu)建瓦氏雅羅魚鰓的cDNA文庫(kù)，為開展魚類抗鹽堿功能基因的研究打下基礎(chǔ),主要結(jié)果如下：
　　 1、本研究以采自達(dá)里湖、松花江的瓦氏雅羅魚F1和綏芬河灘頭雅羅魚Fl為研

3、究對(duì)象，比較分析了生活在不同水環(huán)境下的雅羅魚對(duì)碳酸鹽堿度的適應(yīng)性。結(jié)果表明，達(dá)里湖瓦氏雅羅魚24h LC50極顯著高于綏芬河灘頭雅羅魚的24h LC50(P＜0.01)，顯著高于松花江瓦氏雅羅魚的24h LC50(P＜0.05)，而在12h、48h、72h、96h的LC50，達(dá)里湖瓦氏雅羅魚均極顯著高于松花江瓦氏雅羅魚、綏芬河灘頭雅羅魚(P＜0.01)。在12h、24h、48h、72h、96h的LC50松花江瓦氏雅羅魚與綏芬河灘頭雅羅魚

4、沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)。這說(shuō)明雅羅魚對(duì)堿度的耐受能力與其生存環(huán)境有密切的關(guān)系。
　　 2、本實(shí)驗(yàn)選用5個(gè)瓦氏雅羅魚微衛(wèi)星標(biāo)記和13個(gè)草魚微衛(wèi)星標(biāo)記，對(duì)分別采自達(dá)里湖和烏蘇里江的15尾野生瓦氏雅羅魚個(gè)體進(jìn)行STR-PCR分析。研究結(jié)果顯示18個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記共檢測(cè)到111個(gè)等位基因，平均每個(gè)基因座擴(kuò)增得到6.1667個(gè)等位基因，觀測(cè)雜合度(Ho)0.1000～0.9333，平均為0.5315;期望雜合度(He)0.0966～0

5、.9328，平均為0.6298；多態(tài)信息含量(PIC)0.0905～0.9113，平均為0.5774;烏蘇里江群體的平均等位基因數(shù)和平均觀測(cè)雜合度分別為5.5556和0.5778，達(dá)里湖群體的平均等位基因數(shù)和平均觀測(cè)雜合度均低于烏蘇里江群體的平均等位基因數(shù)和平均觀測(cè)雜合度，分別為4.3889和0.4852。兩個(gè)群體間的遺傳距離(Dc)為0.2550。個(gè)體聚類結(jié)果顯示達(dá)里湖雅羅魚所有個(gè)體聚為一簇，烏蘇里江雅羅魚所有個(gè)體聚為一簇。群體間的遺

6、傳分化指數(shù)(Fst)為0.0855，數(shù)值介于0.05～0.15,Nm值為2.6749，表明這兩個(gè)群體處于中等分化,存在一定程度的基因交流。對(duì)兩個(gè)群體的基因型進(jìn)行了Hardy-Weinberg平衡的卡方檢驗(yàn)，結(jié)果表明兩群體均在一定程度上偏離了平衡。
　　 3、本實(shí)驗(yàn)以鹽堿脅迫下瓦氏雅羅魚鰓組織的cDNA為Tester，淡水生長(zhǎng)條件下的鰓組織cDNA為Driver，利用抑制消減雜交技術(shù)構(gòu)建瓦氏雅羅魚鹽堿脅迫下的消減文庫(kù)。隨機(jī)從文庫(kù)中