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文檔簡介
1、紅曲菌是我國重要的微生物資源,能夠產生多種具有生物活性的代謝產物,具有很高的商業(yè)價值。但是由于紅曲菌產桔霉素問題的存在,對紅曲的安全性提出了懷疑。 本文采用分子生物學技術,初步研究了?;o酶A合成酶(簡稱ACS)和GMC氧化還原酶(簡稱GMC)編碼基因的生物學功能,為闡明桔霉素代謝途徑提供理論依據(jù)。主要研究內容如下: 1.Blast比對分析,預測ACS基因為?;o酶A合成酶的編碼基因,GMC基因為芳香醇脫氫酶的編碼基因,
2、推測ACS和GMC基因可能參與桔霉素生物合成途徑。 2.通過酶切、連接和轉化等DNA重組技術,成功構建了置換型打靶載體pACS-HPH和pGMC-HPH,載體中含有潮霉素抗性標記。 3.采用原生質體PEG介導轉化將置換型打靶載體pACS-HPH和pGMC-HPH分別轉入橙色紅曲菌AS3.4384中,采用潮霉素抗性篩選和基因組DNA的PCR篩選,分別獲得ACS-6和GMC-8紅曲菌缺失菌株。 4.采用HPLC分別檢
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