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1、抑制細(xì)胞色素P-450(CYP450)ω-羥化酶作用20-羥二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic,20-HETE)產(chǎn)生降低,明顯抑制心肌梗死面積。但是20-HETE對心肌細(xì)胞的作用還不清楚。因此,本研究旨在研究20-HETE對細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平和活性氧( ROS)的影響。利用鈣離子熒光探針Fluo-3染色,運用激光共聚焦顯微鏡檢測20-HETE對培養(yǎng)大鼠乳鼠心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及鈣瞬變的影響;ROS熒光探針D
2、HE可穿透細(xì)胞,檢測胞內(nèi)ROS,Image ProPlus軟件測定藥物處理前后熒光強度的變化;運用光澤精化學(xué)發(fā)光法測定NADPH氧化酶活性。20-HETE(0.1umol/L)孵育,可以使胞內(nèi)鈣離子濃度由531±35.0增加到942±47.2,升高44%,且鈣瞬變的幅度由2.8±0.24增加到4.2±0.27升高33%,20-HETE造成的細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載的作用可明顯被ROS清除劑tempol(100 u M)和NADPH氧化酶抑制劑加
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