植物角質(zhì)膜蠟質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子基因SHN1-WIN1的表達(dá)載體構(gòu)建.pdf

1、在植物的生命活動中常遭受病害，蟲害，旱害，紫外線損傷等一系列環(huán)境脅迫。植物為了保護(hù)自身免遭各種脅迫，在其表面形成一種角質(zhì)膜的結(jié)構(gòu)，是植物與外部環(huán)境之間的第一道屏障。角質(zhì)膜組分沉積在植物地上部分外表皮細(xì)胞壁的表面，主要由角質(zhì)和蠟質(zhì)組成，蠟質(zhì)組分沉積在角質(zhì)的表面或嵌插在其中間，這種半剛性疏水結(jié)構(gòu)使角質(zhì)膜成為有效防水和保護(hù)內(nèi)部組織的屏障。角質(zhì)膜的成分和滲透性會影響植物對各種生物和非生物脅迫的抵抗力。目前在植物抗逆基因工程領(lǐng)域，通過轉(zhuǎn)錄因子來提

2、高植物的抗逆性成為研究熱點(diǎn)。從擬南芥中分離的與蠟質(zhì)相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子WIN1/SHN1，可通過直接或間接地激活角質(zhì)和蠟質(zhì)生物合成途徑中編碼酶的基因的轉(zhuǎn)錄，在擬南芥中過表達(dá)，使得角質(zhì)膜的滲透性改變，能增加蠟質(zhì)含量，提高植物的抗旱性。
　　 本試驗(yàn)選取了大葉黃楊(Euonymusjaponicus)，辣椒(Capsicumfrutescens)為研究材料，首先通過酶處理法得到大葉黃楊葉片和辣椒果實(shí)的角質(zhì)膜，通過掃描電子顯微鏡觀察分析角質(zhì)

3、層紋飾的走向，蠟質(zhì)和角質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)，得出大葉黃楊葉片蠟質(zhì)層厚而密，呈片狀結(jié)構(gòu)，角質(zhì)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑相對較小而規(guī)則；而辣椒果實(shí)的蠟質(zhì)層薄，蠟質(zhì)晶體堆積，分布不均勻，角質(zhì)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑大，不規(guī)則。
　　 本實(shí)驗(yàn)以野生型擬南芥花蕾中提取的總RNA為模板，通過RT-PCR的方法擴(kuò)增到與角質(zhì)和蠟質(zhì)合成相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子基因，該目的基因片段SHN1/WIN1(SHN1/WAXINDUCER1約600bp，將此片段克隆到PMD-19T載體上，經(jīng)測序