α-硫辛酸對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠的治療作用及Nrf2表達的影響.pdf

1、目的：多發(fā)性硬化（multiple sclerosis,MS）是一種導致青年人殘疾的常見的自身免疫性脫髓鞘疾病，具體的發(fā)病機制不清，遺傳和環(huán)境等多種因素的共同作用參與并誘導了MS的發(fā)病，近年來，氧化應激（oxidative stress,OS）作為MS的發(fā)病機制之一日益引起人們的關注。
　　核因子 E2相關因子2（nuclear factor erythroid2 related factor2,Nrf2）屬于cap‘n’coll

2、ar（CNC）家族中的一種核轉錄因子。在阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD）、帕金森?。≒arkinson’s disease,PD）、肌萎縮側索硬化癥（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）及多發(fā)性硬化（MS）等疾病中，Nrf2能夠與抗氧化反應原件（antioxidant response element,ARE）結合，提高機體的抗氧化應激能力，從而增強細胞保護、減輕神經損傷、延緩

3、病情進程。Nrf2作為調節(jié)內源性抗氧化應激系統的關鍵調節(jié)因子正逐漸成為人們研究的焦點，為治療提供了新的方向。
　　α-硫辛酸（alpha lipoic acid,α-LA）是一種天然抗氧化劑，本實驗使用α-LA對實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠進行干預，通過觀察EAE小鼠的神經功能缺損評分、體重及精神狀態(tài)、活動度等臨床表現的改變和小鼠脊髓腰膨

4、大組織Nrf2的表達情況，進一步探討α-LA對EAE小鼠的治療和保護作用、對Nrf2表達的影響及其在EAE小鼠中發(fā)揮抗氧化應激的相關機制，為臨床治療MS提供新的理論和實驗依據。
　　方法：
　　1.建立EAE模型使用髓鞘少突膠質細胞糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG）多肽片段作為抗原免疫，神經功能缺損評分大于或等于0.5分為模型成功。
　　2.實驗動物及分組將發(fā)病后的

5、C57BL/6小鼠36只隨機分為EAE組、α-硫辛酸組，每組各18只；另隨機選取18只正常小鼠為正常對照組（normal control group,NC group）。
　　3.干預方法NC組、EAE組：每日腹腔注射等體積的二甲基亞砜（dimethyl sulphoxide,DMSO），共注射14天；α-LA組：每日腹腔注射α-硫辛酸15mg/kg/d。
　　4.觀察指標分別于發(fā)病后第0天、第7天及第14天觀察C57BL/

6、6小鼠自免疫后的神經功能缺損評分、體重、精神狀態(tài)、活動情況等臨床表現；隨后處死小鼠取脊髓腰膨大組織，使用HE染色和免疫組織化學染色的方法觀察小鼠脊髓腰膨大的組織病理學結果，即炎性細胞浸潤程度及Nrf2的表達情況，用實時熒光定量 PCR法測定小鼠脊髓腰膨大組織Nrf2mRNA的表達水平。
　　結果：
　　1.各組小鼠發(fā)病的一般情況和臨床表現：NC組小鼠精神正常、食欲正常、毛色光澤、活動靈活自如、體重逐漸增加；α-LA組、EAE

7、組小鼠自免疫后第10天左右均開始發(fā)病，出現體重下降、尾部及肢體癱瘓、精神差、食欲差、毛色黯淡、活動減少等癥狀，α-LA組小鼠上述癥狀較EAE組小鼠減輕。
　　2.各組小鼠發(fā)病第7天體重：EAE組和α-LA組小鼠體重較NC組均有所下降（P<0.05），但EAE組小鼠體重減輕程度較α-LA組更為明顯（P<0.05）。
　　3.各組小鼠發(fā)病第7天神經功能缺損評分：EAE組及α-LA組小鼠神經功能缺損評分明顯高于NC組（P<0.05

8、），且EAE組小鼠神經功能缺損程度最重（P<0.05）。
　　4.HE染色：EAE0天組（EAE0）、EAE7天組（EAE7）以及EAE14天組（EAE14）小鼠脊髓腰膨大組織均存在炎性細胞浸潤；其中，以EAE7天組炎性細胞浸潤程度最為顯著。α-LA0天組（α-LA0）、α-LA7天組（α-LA7）和α-LA14天組（α-LA14）小鼠炎性細胞浸潤程度較輕，炎性病灶數明顯減少。
　　5.免疫組織化學染色：EAE0、EAE7、

9、EAE14小鼠脊髓腰膨大組織Nrf2陽性細胞數低于NC組（P<0.05）；α-LA7、α-LA14 Nrf2陽性細胞數較正常對照組增多（P<0.05）；α-LA7 Nrf2陽性細胞數高于EAE7天組（P<0.05）；α-LA14 Nrf2陽性細胞數高于EAE14天組（P<0.05）。
　　6.實時熒光定量PCR：EAE14小鼠脊髓腰膨大組織Nrf2mRNA的表達量低于NC組（P<0.05）；α-LA7小鼠脊髓腰膨大組織Nrf2mR

10、NA的表達較EAE7明顯升高（P<0.05）；而α-LA14與EAE14的Nrf2mRNA的表達量無明顯差異（P>0.05）。
　　結論：
　　1.體重下降對EAE小鼠發(fā)病具有提示作用；神經功能缺損評分對病情嚴重程度具有評價作用；α-硫辛酸能夠改善EAE小鼠的精神狀態(tài)、食欲、活動度等臨床表現，減輕EAE小鼠體重下降程度，并降低其神經功能缺損評分，對EAE小鼠具有治療和保護作用。
　　2.Nrf2是機體內重要的抗氧化應激