胚胎肝造血干細胞分化為樹突狀細胞的調控研究.pdf

1、目的：既往研究發(fā)現(xiàn)，小鼠胚胎肝Lin-c-kit+造血干細胞在體外能分化為樹突狀細胞。其分化所需的培養(yǎng)條件除細胞因子GM-CSF+SCF+Flt3L+TNFα外，還需要有基質細胞PA6的存在。本研究擬探討在沒有基質細胞PA6存在的情況下，胚胎肝Lin-c-kit+造血于細胞能否在體外分化為樹突狀細胞，找出決定胚胎肝Lin-c-kit+造血干細胞向樹突狀細胞分化的關鍵因子，并進一步驗證其在體內分化為樹突狀細胞的能力。 方法：采用

2、FACS分離小鼠胚胎肝Lin-c-kit+造血干細胞，以IMDM培養(yǎng)基調整細胞密度為3×104/ml，在細胞因子組合GM-CSF+SCF+Flt3L的基礎上，單獨或聯(lián)合加入細胞因子IL-3、IL-7、IL-15，培養(yǎng)12-14天后，繼續(xù)用GM-CSF+TNFα刺激3-5天。觀察細胞形態(tài)，收集細胞后熒光染色流式細胞儀分析表型，或在混合淋巴細胞反應中檢測刺激異體CD4+T細胞增殖的能力。接著，分別將B6 Ly5.2小鼠胚胎肝或骨髓來源的Li

3、n-c-kit+細胞經(jīng)尾靜脈輸入致死劑量照射的B6 Ly5.1受鼠體內，建立造血重建的嵌合鼠模型。在特定的時間點觀察胚胎肝Lin-c-kit+細胞在體內分化為樹突狀細胞的能力，比較其與骨髓細胞來源的樹突狀細胞在表型及功能上的異同；將中和型抗IL-3或抗IL-7抗體注射入受鼠腹腔，觀察并比較不同因子對Lin'c-kit+造血干細胞體內分化為樹突狀細胞的影響。 結果：⑴在沒有基質細胞PA6，僅存在GM-CSF+SCF+Flt3L+

4、TNFα的條件下，IL-3能誘導胚胎肝Lin'c-kit+細胞分化為樹突狀細胞，這些樹突狀細胞在混合淋巴細胞反應中能刺激初始CD4+T細胞增殖。IL-7能提高IL-3誘導產(chǎn)生的樹突狀細胞數(shù)量，但IL-7或IL-15均不能誘導胚胎肝Lin'c-kit+細胞分化為樹突狀細胞。⑵胚胎肝Lin'c-kit+細胞輸入致死劑量照射的受鼠后，能夠分化為脾臟DC。這些DC高表達Ia、CD11c，同時表達中等水平的CD40、DEC205、Thy1.2、C

5、D8a；同時發(fā)現(xiàn)，胚胎肝Lin'c-kit+細胞能夠在體內分化為皮膚郎格罕氏細胞，這些細胞表達E-cadherin、Ia、DEC205和Thy1.2，但僅表達低水平的CD11c，且不表達CD8a。無論是脾臟還是皮膚的樹突狀細胞，均能有效刺激T細胞增殖。中和型抗IL-3抗體能抑制胚胎肝來源的Lin'c-kit+細胞向樹突狀細胞分化，而中和型抗IL-7抗體則不影響胚胎肝Lin'c-kit+細胞在體內向樹突狀細胞分化。 結論：①胚胎