葉酸修飾的和厚樸酚主動靶向藥物對鼻咽癌的抑制作用與機(jī)制研究.pdf

1、目的：制備并驗(yàn)證葉酸修飾的靶向人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞的和厚樸酚的納米藥物系統(tǒng)，并探討其對鼻咽癌抑制效果和機(jī)制。
　　方法：本文使用兩親性三嵌段聚合物：聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚己內(nèi)酯（PCL-PEG-PCL,PCEC）為原材料，采用聚醚酰亞胺（PEI）引入胺基后，與葉酸（Folate, FA）共價結(jié)合，制備了目標(biāo)載體聚合物PCEC-PEI-FA。然后，以PCEC-PEI-FA聚合物為載體材料，通過薄膜分散法自主裝負(fù)載和厚樸酚形成具有主

2、動靶向功能的載藥納米粒（ATNH），并使用透射電鏡、激光粒度儀、紅外光譜儀及核磁氫譜考察納米聚合物的形貌、粒徑及結(jié)構(gòu)，溶血實(shí)驗(yàn)考察溶血安全性、透析法考察體外釋藥特性。使用噻唑藍(lán)（methylthiazoletetrazolium，-MTT）試驗(yàn)及熒光顯微鏡分別研究了該納米粒的細(xì)胞毒性和主動靶向作用。建立人鼻咽癌裸鼠體內(nèi)皮下移植瘤模型，并接受主動靶向納米粒的治療。腫瘤再生長延遲時間曲線和中位生存期用于評價載藥納米粒的抗腫瘤療效。18F-脫

3、氧葡萄糖（fluorine-18-deoxyglucose, FDG） PET/CT顯像用于評價腫瘤對載藥納米粒的早期反應(yīng)。此外，載藥納米粒的抗腫瘤機(jī)制研究是通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布與細(xì)胞凋亡和免疫組化檢測血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子（CD31）反應(yīng)抗血管生成作用及增殖細(xì)胞核抗原（Ki67）反應(yīng)抗增殖作用。
　　結(jié)果：該研究制備的主動靶向功能的和厚樸酚納米粒（ATNH）呈球形，平均流體動力學(xué)直徑為188.34±0.54 nm,無

4、明顯的突發(fā)釋放，并呈現(xiàn)出緩慢釋藥的特點(diǎn)，未發(fā)生溶血現(xiàn)象。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：主動靶向載藥納米粒（ATNH）對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性明顯高于普通和厚樸酚，其作用機(jī)制可能與葉酸受體（folate receptor, FR）介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞作用有關(guān)。主動靶向載藥納米（ATNH）組的細(xì)胞凋亡指數(shù)為86.07±4.95％，明顯高于各對照組（P＜0.01）.體內(nèi)研究結(jié)果表明，主動靶向載藥納米粒（ATHN）組的腫瘤延遲生長時間及中位生存時間分別為24天及5

5、7.5天，明顯高于普通和厚樸酚對照組（腫瘤延遲生長時間及中位生存時間分別為8天及34天）及非主動靶向納米組（腫瘤延遲生長時間及中位生存時間分別為18天及42.5天（P＜0.01）。小動物PET/CT顯像結(jié)果示主動靶向載藥納米粒（ATHN）組的T/M值為1.03±0.42(P＜0.01)。免疫組化結(jié)果顯示：主動靶向載藥納米粒（ATHN）組的Ki67陽性指數(shù)為37.24±3.89%(P＜0.01)，CD31陽性指數(shù)為2.16±0.76(P＜

6、0.01)。與對照組相比，主動靶向載藥納米粒（ATHN）組在G1期的細(xì)胞比例升高，為51.24±3.95%，明顯高于對照組（p＜0.01）。
　　結(jié)論：葉酸修飾的和厚樸酚納米粒具有對鼻咽癌細(xì)胞（HNE-1）的主動特異性靶向功能，對鼻咽癌移植瘤具有非常明顯的抗腫瘤作用。其抗癌機(jī)制可能與誘導(dǎo)人鼻咽癌細(xì)胞凋亡，G1期細(xì)胞周期阻滯，抑制腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤血管生成，并抑制腫瘤代謝有關(guān)。表明該載藥納米粒對于治療鼻咽癌等細(xì)胞表面葉酸受體表達(dá)豐富