人IFNγ對鼻咽癌模型的抗腫瘤作用與機(jī)制研究.pdf

1、鼻咽癌是東南亞和地中海地區(qū)常見的頭頸部惡性腫瘤，患者主要為中青年。鼻咽癌的首選療法為放射治療，即使結(jié)合順鉑化療，患者的5年生存率也僅為70％。因此，迄需研發(fā)新的治療方法。 本課題對重組IFN γ蛋白對鼻咽癌的抗腫瘤作用及其機(jī)制進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1、CNE-2與C666-1均表達(dá)有活性的IFN γ受體及其下游效應(yīng)因子(Jak-1、Jak-2、Stat-1與IRF-1)。IFN γ可激活3株鼻咽癌細(xì)胞中的Ja

2、k-Stat信號通路，并以劑量與時間依賴性的方式抑制細(xì)胞的生長。IFN γ的抗增殖作用與G0/G1期阻滯和細(xì)胞凋亡相關(guān)。IFN γ誘導(dǎo)的G0/G1期阻滯與周期素依賴性蛋白激酶抑制蛋白p21、p27和/或p15的誘導(dǎo)，以及CDK4、CDK6與CDK2的下調(diào)有關(guān)。而工FN γ誘導(dǎo)的凋亡則有Bak上調(diào)、Bcl-X和/或Bcl-2下調(diào)、ICE家族分子(caspase-1、-3、-8、-9)激活的參與。以2 × 10<'6>IU/Kg/d的

3、劑量瘤內(nèi)注射IFN γ，連續(xù)給藥21天，可顯著提高CNE-2、C666-1移植瘤小鼠的生存率(P<0.05)，抑瘤率分別達(dá)到47.8％和50％。這些結(jié)果表明，IFN γ可通過誘導(dǎo)GO/G1期阻滯和細(xì)胞凋亡直接抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖，并抑制鼻咽癌移植瘤的生長，因此，IFN Y治療有望成為鼻咽癌治療的新療法。重組IFN γ蛋白的臨床應(yīng)用受到其半衰期短及毒副作用的限制，因此，我們構(gòu)建了攜帶IFN γ基因的重組小環(huán)載體(minicircle-IF

4、N γ)，研究IFN γ基因治療在鼻咽癌治療中的應(yīng)用。將minicircle-IFN γ及攜帶相同表達(dá)盒的母質(zhì)粒p2ΦC31-IFN γ轉(zhuǎn)染293、NIH3T3、CNE-1、CNE-2與C666-1細(xì)胞，小環(huán)載體所介導(dǎo)的外源基因表達(dá)較p2①C31高19至102倍，而且可更有效的抑制CNE-1、CNE-2與C666-1的生長，將細(xì)胞的相對生長率分別降低至7．1％±1．6％、2．7％±1．0％與6．1％±1．6％。流式細(xì)胞檢測和caspas

5、e-3活性分析表明，IFN γ基因治療可通過誘導(dǎo)細(xì)胞G0/G1期阻滯和凋亡直接抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖。在CNE-2與C666-1移植瘤模型中，小環(huán)載體介導(dǎo)的瘤內(nèi)基因表達(dá)較p2ΦC31-IFN γ高11至14倍，且表達(dá)可持續(xù)達(dá)21天。與p2ΦC31-IFN γ處理組小鼠相比，小環(huán)載體處理組小鼠的生存率顯著提高(P<0．05)，抑瘤率分別達(dá)到77．5％和83％。我們的研究表明，IFN γ基因治療可在體外直接抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖，并在體內(nèi)抑制移