豆皮過(guò)氧化物酶的純化及其催化化學(xué)發(fā)光的特性.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)主要研究了豆皮過(guò)氧化物酶（SBP）的純化工藝、酶學(xué)性質(zhì)及催化魯米諾化學(xué)發(fā)光的最佳條件。
　　 本實(shí)驗(yàn)選用SBP含量為684U/g的大豆作為實(shí)驗(yàn)材料。采用濃度梯度聚丙烯酰胺凝膠電泳及活性染色，證明SBP中只有一種同工酶占有絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。確定了抽提SBP的最佳條件：pH7.0、5mmol/LZn2+、4小時(shí)。通過(guò)硫酸鋅沉淀、60℃水浴加熱、DEAE-cellulose離子交換層析、Sephdex G-100凝膠過(guò)濾和Sephdex

2、 G-25凝膠過(guò)濾，將SBP的比活力提高了31.9倍，酶活力回收達(dá)17.9％。分別通過(guò)SDS-PAGE電泳法、Rz值法鑒定了SBP的純度，證明SBP已達(dá)到了電泳純，Rz值大于3.0。
　　 SBP酶學(xué)性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn)，其在熱穩(wěn)定性、酸堿耐受性及時(shí)間穩(wěn)定性方面與HRP比具有較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。SBP在pH4.0-10.0條件下保存，酶活力都可以保留80％以上；70℃保溫15min，酶剩余活力將近90％；與HRP相比，SBP在儲(chǔ)存的不同時(shí)間段，

3、酶存活率都要高出5-10％。
　　 發(fā)現(xiàn)由SBP、HRP催化的魯米諾發(fā)光體系所發(fā)射光的波長(zhǎng)均為440nm左右，最適pH均為8.5。SBP和HRP催化體系中魯米諾、過(guò)氧化氫最適濃度分別為7.5mmol/L、20mmol/L和2.5mmol/L、15mmol/L。四苯硼鈉對(duì)SBP催化發(fā)光的效率可增大1.5倍，0.2mmol/L對(duì)羥基聯(lián)苯可以放大SBP催化發(fā)光效率7.5倍，因此對(duì)羥基聯(lián)苯對(duì)SBP具有更明顯的增強(qiáng)效果。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，溫度對(duì)魯