費氏中華根瘤菌HN01 smrA所在基因簇的啟動子結(jié)構(gòu)及調(diào)控初步研究.pdf

1、本實驗室利用轉(zhuǎn)座子突變法從費氏中華根瘤菌}tN01基因組中篩選到一個與硫代謝相關(guān)并影響菌株結(jié)瘤能力和結(jié)瘤時間的基因smrA。通過序列分析發(fā)現(xiàn)在smrA的上游有4個轉(zhuǎn)錄方向相同的基因即ORFa、ORFb、ORFc、ORFd和一個共同的啟動子序列，而在該基因的下游是另外一個具有相同轉(zhuǎn)錄方向的基因ORFe。在ORFd和ORFe之間也存在可能的啟動子序列。本工作的目的一是驗證smrA基因是否與其它基因共同組成一個操縱子；二是研究硫?qū)υ摬倏v子表達

2、調(diào)控的影響。 首先對兩個可能的啟動子區(qū)域P1和P2的啟動子活性進行了研究。根據(jù)測序的結(jié)果設(shè)計引物，通過PCR擴增得到了ORFa的ATG上游297 bp長的P1片段和ORFe上游321 bp長的P2片段。通過融合PCR將這兩個片段分別融合到無啟動子的gus基因上游。將這兩個融合片段插入質(zhì)粒載體pTR102，通過三親本結(jié)合法導(dǎo)入費氏中華根瘤菌HN01中。對這兩個重組根瘤菌進行GUS活性檢測以驗證導(dǎo)入片段的啟動子活性，結(jié)果表明P1和P

3、2片段都具有啟動子功能，從而說明了smrA基因所在操縱子包括了ORFa、ORFb、ORFc和ORFd，但不包括ORFe。通過研究硫源對P1片段啟動子活性的影響發(fā)現(xiàn)，在添加有碳源和氮源的MM培養(yǎng)基中，啟動子活性最高，而在添加了碳、氮、硫源(硫源分別為Na<,2>SO<,4>、Na<,2>SO<,3>、Na<,2>S<,2>O<,3>和Met)的MM培養(yǎng)基中，啟動子活性均有明顯降低，推測硫?qū)1片段的啟動子活性有抑制作用。對P1片段進行5’