運用負壓外擴張誘導構建預擴張的脂肪組織.pdf

1、目的：
　　因先天性畸形、外科手術、意外創(chuàng)傷等多種原因導致的軟組織缺損是整形外科臨床診療過程中經(jīng)常遇到的問題，而尋找到合適的軟組織來源用于這種軟組織缺損的修復重建一直是整形外科醫(yī)生面臨的巨大難題。
　　已經(jīng)有越來越多的學者證實，機械牽拉能產(chǎn)生組織再生效應。臨床上也已經(jīng)有多種基于組織機械拉伸的治療裝置。埋置擴張器是臨床中廣泛應用的技術，其基于組織擴張的原理，對軟組織進行機械擴張，被證實能夠促進組織細胞的分裂增殖從而增加皮膚軟組

2、織面積，在皮膚和軟組織的修復缺損以及體表器官的再造中發(fā)揮關鍵作用。近年，通過負壓外吸引產(chǎn)生組織外擴張的裝置Brava被發(fā)明，其基于組織機械拉伸的原理，連續(xù)使用一段時間則可以產(chǎn)生穩(wěn)定的組織生長。Brava誘導產(chǎn)生組織再生的證據(jù)給了我們啟發(fā)，因為通過負壓外吸引產(chǎn)生組織外擴張的方式具有無創(chuàng)性，因而更能獲得患者的認可，也就意味著具有更大的臨床應用價值。
　　本研究擬通過設計大鼠脂肪瓣負壓外擴張模型，對帶血管蒂的島狀脂肪瓣外部進行負壓外擴張

3、，驗證脂肪瓣能否在單純機械力作用下產(chǎn)生組織再生，同時研究脂肪瓣在負壓外擴張之后發(fā)生的細胞水平和分子水平的變化，初步揭示負壓外擴張產(chǎn)生脂肪組織再生的機制，為臨床修復軟組織缺損提供一個新的選擇。
　　方法：
　　本研究分為兩個部分：
　　1.運用負壓外擴張誘導構建預擴張的脂肪組織的組織學觀察
　　構建大鼠帶血管蒂脂肪瓣負壓外擴張模型，觀察經(jīng)過不同時間的負壓外擴張之后脂肪瓣體積的變化，驗證負壓外擴張是否獲得脂肪組織的生

4、長，并通過HE染色、免疫熒光、RT-PCR揭示脂肪瓣在負壓外擴張之后組織學的動態(tài)變化過程。收集數(shù)據(jù)后采用相應的統(tǒng)計學方法進行分析處理。
　　2.負壓外擴張誘導脂肪組織再生的機制的初步研究
　　利用大鼠脂肪瓣負壓外擴張模型，觀察負壓外擴張之后脂肪組織中炎癥細胞因子表達情況，探討負壓外擴張所產(chǎn)生的炎癥微環(huán)境對于脂肪組織再生所發(fā)揮的誘導和調(diào)節(jié)作用。收集數(shù)據(jù)后采用相應的統(tǒng)計學方法進行分析處理。
　　結果：
　　1.對照組

5、脂肪瓣體積增長不明顯；實驗組體積隨時間增加而增長明顯。脂肪瓣體積由基線的1.633±0.163ml在第4周增加為1.783±0.147ml（對照組）和2.15±0.350ml（實驗組）；第8周增加為1.850±0.164ml（對照組）和2.917±0.365ml（實驗組）；第12周增加為1.867±0.150ml（對照組）和3.717±0.337ml（實驗組）。其中實驗組脂肪瓣在第4周（P<0.05）、8周（P<0.001）和12周（P

6、<0.001）均大于對照組。實驗組脂肪瓣在16周降低為3.317±0.256ml，較12周實驗組有部分回縮（P<0.05），但仍然是基線體積的約兩倍。
　　經(jīng)過負壓外吸引后脂肪組織中血管化豐富的纖維結締成分增多。血管計數(shù)結果顯示實驗組毛細血管密度在第4、8、12周均表現(xiàn)出顯著高于對照組，在第16周相較于12周有明顯的回落，呈現(xiàn)為接近基線脂肪瓣的水平。
　　脂肪組織中ki67+/CD34+細胞在實驗組中顯著增加，在1周時達到峰

7、值，然后從4周到12周呈現(xiàn)逐漸下降。統(tǒng)計學分析顯示在第1、4、8、12周，實驗組的ki67+/CD34+細胞數(shù)多于對照組，在16周則降為接近對照組。該結果提示負壓外擴張之后發(fā)生了活躍的血管重構和細胞增殖。
　　脂肪組織經(jīng)過負壓外吸引1周后，PPARγ和CEBPβ的相對表達量即有顯著升高；隨著處理的時間增加，其相對表達量進一步增加；在停止負壓外吸引后，PPARγ和CEBPβ的相對表達量回落到低水平。該研究結果提示負壓外擴張?zhí)幚砟軌蛏?/p>

8、調(diào)成脂分化過程。
　　2.實驗組在經(jīng)過負壓外吸引后，IL-1β，IL-6，TNF-α，MIF水平顯著升高，在1周時達到峰值，其中IL-1β、IL-6分別升高約3、6倍，TNF-α升高約13倍，MIF升高約14倍。在4、8、12周各因子水平均有回落，但仍然維持高表達水平，對比第1周時降低差異顯著。停止負壓外吸引后各因子水平繼續(xù)回落至對照組水平。結合第一章的結果，提示負壓外擴張產(chǎn)生的炎癥反應狀態(tài)可能參與了脂肪組織再生的調(diào)控。