2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  1.檢測BALB/c小鼠脾臟基質(zhì)的增齡性變化,探討β-catenin信號分子在脾臟基質(zhì)老化中的作用。
  2.檢測BALB/c小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞比例、B淋巴細(xì)胞亞群比例和增殖、凋亡、周期相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的增齡性變化,探討基質(zhì)老化對B細(xì)胞老化的影響。
  3.探索C57BL/6J小鼠來源的同種異基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對BALB/c小鼠脾臟基質(zhì)和B細(xì)胞老化的影響。
  方法:
  1.將雌

2、性BALB/c小鼠分別按照2-4月齡、8-10月齡和18-20月齡定義為青年組、中年組和老年組。蘇木精-伊紅染色觀察不同年齡組小鼠脾臟的組織學(xué)特征;天狼星紅染色檢測脾臟中膠原分布情況;免疫組織化學(xué)法檢測脾臟collagenⅠ、elastin、fibronectin的蛋白表達(dá)情況。
  2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)法檢測不同年齡組BALB/c小鼠脾臟基質(zhì)成分agrin、cogegeⅠα1、collegenⅢα

3、1、collegenⅣα1、collegenⅥα1、elastin、fibrillin1、fibronectin1、fibulin1、lamininα5、MMP-2的mRNA表達(dá)水平,β-catenin信號分子及其上游調(diào)控子DVL2、DVL3、CK1、GSK-3β,下游轉(zhuǎn)錄子TCF4,靶基因PPARδ、Axin2、c-myc、cyclin D1的mRNA相對表達(dá)量,蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測β-catenin和CK1的

4、蛋白表達(dá)情況,Real-time PCR法檢測B細(xì)胞標(biāo)記CD19的mRNA相對表達(dá)量。
  3.制備脾臟單細(xì)胞懸液,流式細(xì)胞術(shù)檢測不同年齡組BALB/c小鼠脾臟CD19+B淋巴細(xì)胞比例及B細(xì)胞中CD19+ CD5+、CD19+ CD24+、CD19+IgM+IgD-和CD19+IgD+細(xì)胞亞群的比例。
  4.流式細(xì)胞術(shù)分選、收集脾臟B淋巴細(xì)胞,Real-time PCR法檢測B細(xì)胞中增殖相關(guān)基因Ki-67,凋亡相關(guān)基因Ba

5、x、Bcl-2、Caspase3、Caspase8,細(xì)胞周期相關(guān)基因cyclinD1、cyclinE1、p16INK4a,抗原決定簇分子CD5、CD24,β-catenin信號分子及其上游調(diào)控子DVL2、DVL3、CK1、GSK-3β,下游轉(zhuǎn)錄子TCF4,靶基因PPARδ、Axin2、c-myc的mRNA相對表達(dá)量。
  5.骨片消化法分離、培養(yǎng)C57BL/6J小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)。
  6.通過尾靜脈向?qū)嶒?yàn)組

6、小鼠體內(nèi)注射BMSCs,每2周注射一次,連續(xù)注射4次,單次注射量1×106個(gè)細(xì)胞(懸于100μl PBS),末次注射后2周取材,重復(fù)檢測上述脾臟基質(zhì)和B細(xì)胞老化相關(guān)指標(biāo)的變化。
  結(jié)果:
  第一部分
  1.老年組小鼠脾臟組織結(jié)構(gòu)紊亂,含鐵血黃素顆粒和Ⅰ型膠原沉積較青年組增加。
  2.老年組小鼠脾臟基質(zhì)成分agrin、collagenⅠα1、collagenⅢⅢα1、collagenⅣα1、elastin和

7、fibrillin1的mRNA相對表達(dá)量顯著低于青年組小鼠(P<0.01或P<0.05);collagenⅥα1、fibronectin1、fibulin1、lamininα5和MMP2的mRNA相對表達(dá)量與青年組小鼠無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
  3.老年組小鼠脾臟β-catenin信號分子及其上游調(diào)控子CK1的mRNA和蛋白表達(dá)水平均低于青年組(P<0.05或P<0.01),下游靶基因PPARδ、cyclin D1、CD44的mRNA表達(dá)

8、水平顯著低于青年組(P<0.01或P<0.05);其他調(diào)控子DVL2、DVL3、GSK-3β,下游轉(zhuǎn)錄子TCF4,靶基因Axin2的mRNA相對表達(dá)量均值低于青年組,但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
  4.經(jīng)過4次C57BL/6J小鼠來源的同種異基因BMSCs移植后,老年組BALB/c小鼠脾臟基質(zhì)成分collagenⅢα1的mRNA表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.01),collagenⅣα1和fibronectin1的mRNA表達(dá)下

9、調(diào)(P<0.05和P<0.01);β-catenin信號分子的下游轉(zhuǎn)錄子TCF4和靶基因CD44 mRNA表達(dá)上調(diào)(P<0.05),其余相關(guān)基因表達(dá)無明顯變化。
  第二部分
  1.不同年齡組BALB/c小鼠脾臟中B淋巴細(xì)胞比例無顯著差異,老年組小鼠脾臟B細(xì)胞中CD19+ CD5+、CD19+ IgD+細(xì)胞亞群比例顯著高于青年組(P<0.01),CD19+ CD24+、CD19+ IgM+ IgD-細(xì)胞亞群比例顯著低于青年

10、組(P<0.01)。老年組脾臟B細(xì)胞中CD24、Ki-67的mRNA表達(dá)水平顯著低于青年組(P<0.01),CD5、Bcl-2、caspase8和p16INK4α的mRNA表達(dá)水平顯著高于青年組(P<0.05或P<0.01),Bax、caspase3、cyclinD1和cyclin E1的mRNA表達(dá)水平與青年組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
  2.不同年齡組BALB/c小鼠脾臟B細(xì)胞中β-catenin信號分子及其上游調(diào)控子DVL2、DVL3

11、、CK1,下游靶基因PPARδ、CD44、Axin2的mRNA表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
  3.經(jīng)過4次C57BL/6J小鼠來源的同種異基因BMSCs移植后,老年組小鼠脾臟B細(xì)胞比例和CD19的mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.01);B細(xì)胞中CD19+CD5+、CD19+ CD24+和CD19+ IgD+亞群比例顯著降低(P<0.01或P<0.05);Ki-67和p16INK4α的mRNA表達(dá)水平上調(diào)(P<0.01),CD5、CD

12、24和Caspase8的mRNA表達(dá)水平下調(diào)(P<0.05),其余基因表達(dá)無明顯變化。
  結(jié)論:
  1.小鼠脾臟基質(zhì)老化表現(xiàn)為多種細(xì)胞外基質(zhì)成分的mRNA表達(dá)水平下調(diào)。
  2.β-catenin信號分子對脾臟基質(zhì)老化有重要作用。
  3.隨著年齡增加,小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞比例維持穩(wěn)定,但增殖活性降低,部分亞群比例發(fā)生改變,可能與基質(zhì)老化有關(guān)。
  4.同種異基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可以影響部分老化相關(guān)的

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