OST對KCNE1蛋白糖基化影響的初步研究.pdf

1、KCNE1作為輔助亞基與功能亞基KCNQ1以4:2的比例裝配形成異源多聚體KCNQ1/KCNE1鉀通道。KCNE1單獨表達不能形成功能性通道，KCNQ1/KCNE1共同表達使KCNQ1通道電流增加，激活速率減慢，電壓依賴性曲線呈正向偏移，因而KCNE1對于KCNQ1/KCNE1通道慢激活特征的維持是不可替代的。
　　KCNE1在N-端胞外段有2個N-連接糖基化位點，分別是第5和第26位的天冬酰胺。已發(fā)現(xiàn)的N5位N-連接糖基化的突變

2、(T7I)與LQTS及尼爾森綜合征有關。這提示我們，KCNE1作為輔助亞基，其N-連接糖基化位點的突變可能對KCNQ1通道具有調節(jié)作用，但具體的調節(jié)效應不明，KCNE1糖基化的調控機制也沒有明確的報道。
　　N-連接糖基化通常始于新生肽鏈翻譯過程中通過易位子(translocon)進入內質網(wǎng)腔的過程中。高甘露寡聚糖在糖基轉移酶(oligosaccharyltransferase OST)的作用下從多萜醇Dol-PP轉移到靶蛋白的天

3、冬酰胺上。哺乳動物細胞的OST是由9個亞基組成的復合體，其中STT3A和STT3B是完成酶促反應的關鍵分子，它們具有識別寡糖底物和糖基化位點的雙重功能。
　　我們通過siRNA konck-down技術下調小鼠心肌細胞中stt3b的表達，經(jīng)檢測stt3b在mRNA和蛋白水平分別下降了96.1％(P<0.01)和17％(P<0.01)。STT3B蛋白的下調影響了KCNE1 N-連接糖基化的水平，使其蛋白糖基化與非糖基化比例下降了20

4、％(P<0.01)。由此證明了KCNE1蛋白N-連接糖基化受到OST酶的調節(jié)。
　　為了解KCNE1 N-連接糖基化的功能，我們構建了針對KCNE1 N-連接糖基化位點的突變體：KCNE1-N5Q、KCNE1-N26Q、KCNE1-N5，26Q，并在HEK293細胞系中與KCNQ1共同表達。運用全細胞膜片鉗技術，我們以電流密度、標準化I-V曲線及通道激活/失活時間常數(shù)t值等電生理參數(shù)為指標，這三種突變體與野生型KCNQ1/KCNE