一株產(chǎn)花生四烯酸菌富硒機(jī)理及產(chǎn)物抗氧化降血脂功能研究.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：1、堅持以“求實、創(chuàng)新一的科學(xué)精神從事研究工作。2、本論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。3、本論文中除引文外，所有實驗、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實的。4、本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。5、其他同志對本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。研究生簽名：日期：學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解南京師范大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，

2、學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版；有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱；有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索；有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。‘研究生簽名：日期：盟4皿世吁罩叢一一址畢衄址一場劃摘要摘要硒是人和動物所必需的微量元素，具有多種重要的生物學(xué)功能。本研究首先以輪梗霉融合株DA1作為富硒的載體，進(jìn)行輪梗霉富硒條件優(yōu)

3、化。通過單因子試驗，研究不同的培養(yǎng)條件對輪梗霉富硒的影響，并選取對輪梗霉富硒影響較大的四個因素進(jìn)行正交實驗設(shè)計。結(jié)果表明，輪梗霉在發(fā)酵培養(yǎng)基中亞硒酸鈉濃度為90tg／ml時，菌絲體硒含量最大。在優(yōu)化的發(fā)酵條件下，麥芽糖1009／L，酵母膏109／L，溫度18“C，搖床轉(zhuǎn)速120r／min，菌體硒含量最終可達(dá)32667999／g，細(xì)胞富集的有機(jī)態(tài)硒占總富集量的8508％。其次，對富硒輪梗霉融合株DA1保健作用進(jìn)行分析。結(jié)果表明，富硒輪梗霉

4、能顯著降低高脂血癥小鼠的TC、TG和LDLC，升高HDLC，降低高脂血癥小鼠MDA的水平，提高SOD、GSH—Px活性。亞硒酸鈉組中組織硒含量顯著高于對照組但低于富硒輪梗霉和奶醋富硒輪梗霉組。富硒輪梗霉能顯著提高機(jī)體降血脂和抗氧化能力，與奶醋復(fù)配后效果仍優(yōu)于其他組別。本研究進(jìn)一步探討了在90“g／ml硒脅迫條件下，輪梗霉融合株DA1不飽和脂肪酸組分以及GSHPx和SOD活性以及其他因子的變化。結(jié)果表明，在硒脅迫條件下，輪梗霉融合株DA1

5、亞油酸(LA)含量為377％，比對照259％提高了15倍，花生四烯酸(AA)含量相比于對照增加了17倍。在不同的培養(yǎng)條件下，硒脅迫組的LA和AA含量都比對照高。但是二十碳五烯酸(EPA)和Y亞麻酸含量沒有顯著地變化。硒脅迫增加了蛋白質(zhì)和可溶性多糖的含量，但是抑制輪梗霉融合株D—A1的生長?？寡趸福鏕SHPx和SOD，在9099／ml硒脅迫下活性增強(qiáng)。與對照相比，處理組的半胱氨酸和胱氨酸含量分別減少了857％和808％。硒蛋白(592

6、％一675％)是硒在輪梗霉內(nèi)的主要存在形式。硒脅迫能夠促進(jìn)輪梗霉融合株DA1不飽和脂肪酸的積累，尤其是LA和AA。A6脂肪酸脫飽和酶是LA轉(zhuǎn)化為丫亞麻酸步驟的限速酶，為了分析硒脅迫促進(jìn)不飽和脂肪酸變化的機(jī)理，我們進(jìn)一步克隆了輪梗霉融合株DAl的A6脫飽和酶基因的保守區(qū)并分析其功能。根據(jù)己報道的A6脫飽和酶保守的氨基酸序列設(shè)計引物，進(jìn)行RT—PCR，獲得一段長度為705bp、編碼235個氨基酸的序列。推測的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脫飽和