花生四烯酸的高效生物合成及定向轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、花生四烯酸(Arachidonic Acid，簡(jiǎn)稱(chēng)AA)，是ω-6系列多不飽和脂肪酸的代謝樞紐，它參與了人體代謝調(diào)控的諸多活動(dòng)，同時(shí)在很多疾病的生理過(guò)程中也發(fā)揮了作用。鑒于它廣泛的應(yīng)用途徑和良好開(kāi)發(fā)前景，使得它巨大的商業(yè)價(jià)值不容忽視。本文以高山被孢霉M2作為研究對(duì)象，以AA高產(chǎn)和高轉(zhuǎn)化率為目標(biāo)，進(jìn)行了AA的高效合成和定向轉(zhuǎn)化研究，取得了如下研究結(jié)果：
　　 1. 優(yōu)化培養(yǎng)基的C/N 比為44，初始pH值為6.5，并添加NADPH

2、 調(diào)節(jié)劑，如豆芽汁、谷氨酸等培養(yǎng)菌體，菌體呈絮狀球團(tuán)狀，傳質(zhì)效果良好。同等培養(yǎng)時(shí)間下促進(jìn)了菌體生長(zhǎng)和油脂積累，AA 產(chǎn)量是未優(yōu)化前的1.32 倍。
　　 2. 培養(yǎng)基中添加豆油可以提高油脂產(chǎn)量，但抑制了AA的合成。優(yōu)化豆油的添加量為0.5%時(shí)，AA產(chǎn)量達(dá)到3.0 g/L。
　　 3. 選擇花生餅粉作為復(fù)合氮源可以促進(jìn)菌體生長(zhǎng)和油脂積累，但對(duì)AA的合成有明顯抑制作用。使用有機(jī)溶劑處理后，確定了花生餅粉的活性部位，再選用更為

3、純凈的花生蛋白粉替代花生餅粉，有效的提高了AA的產(chǎn)量。添加25 g/100 ml花生蛋白粉浸汁時(shí)AA 產(chǎn)量為5.7 g/L，是未添加花生蛋白粉培養(yǎng)基AA 產(chǎn)量的1.86 倍。
　　 4. 通過(guò)對(duì)菌體生長(zhǎng)及營(yíng)養(yǎng)物代謝曲線的研究確定了補(bǔ)料的方式。分批補(bǔ)料時(shí)次數(shù)不宜過(guò)多，在發(fā)酵2 d后分兩次補(bǔ)料最佳。第5 d 糖源消耗較大時(shí)，流加補(bǔ)入葡萄糖45 g/L，酵母粉為3 g/L、KNO3和NaNO3 1 g/L進(jìn)行中期補(bǔ)料使AA 產(chǎn)量達(dá)到5