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文檔簡介
1、背景三基序蛋白TRIM22(tripartite motif22),也被稱為Staf50(stimulatedtrans-acting factor of50 kD),因其具有包含RING區(qū),B-box區(qū)和卷曲螺旋區(qū)的RBCC結(jié)構(gòu)序列,而被歸于三基序蛋白TRIM家族中的一員。TRIM22是抑癌基因P53的靶基因之一,其過表達可以激活NF-κB,并且N端RING結(jié)構(gòu)域及C端SPRY結(jié)構(gòu)域?qū)ζ湓贜F-κB活動,抗病毒以及自身免疫疾病中的介導
2、過程十分重要。已有研究證明TRIM22呈現(xiàn)RING結(jié)構(gòu)域依賴性E3泛素連接酶活性,可參與病毒復制的抑制,具有抗腫瘤增殖作用,但其特定分子功能尚未闡明。真核細胞翻譯起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor4E,簡稱“eIF4E”)是一種帽結(jié)合蛋白,可以特異性地識別mRNA的5'端的帽子結(jié)構(gòu),從而啟動翻譯。eIF4E過度表達會導致增加擴散,逃避凋亡,腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。血液腫瘤中,eIF4E
3、高表達在急性淋巴系統(tǒng)白血病中較少發(fā)生,在淋巴瘤,骨髓增生異常綜合癥,急慢性髓系白血病中較多見,對eIF4E基因表達水平的檢測對監(jiān)測AML疾病狀況有重要意義。
目的:探討在人急性髓系白血病細胞粒系分化過程中TRIM22的功能及與eIF4E的相互作用,從而進一步闡明TRIM22靶向調(diào)控eIF4E的機制,為白血病治療尋找新靶點提供重要依據(jù)。
方法:體外實驗建立ATRA誘導HL-60及NB4細胞分化模型,應用RT-PCR,q
4、-PCR及Western Blotting技術檢測TRIM22與eIF4E的基因與蛋白表達的變化,并通過電穿孔轉(zhuǎn)染技術敲低或過表達TRIM22后,利用CCK-8和流式細胞術檢測其對細胞功能的影響,以及Western Blotting技術檢測對eIF4E蛋白表達水平的影響。最后采用免疫共沉淀實驗(CO-IP)驗證TRIM22與eIF4E的相互作用。
結(jié)果:ATRA誘導HL-60及NB4細胞后,TRIM22的基因及蛋白表達水平均升
5、高,eIF4E的基因及蛋白表達水平均降低。其中q-PCR檢測NB4細胞在誘導前后mRNA相對表達量由1.01±0.15逐漸升高到30.98±2.79(F=280.70,P=0.000),Western blotting檢測其蛋白相對表達水平由0.22±0.03逐漸升高至0.51±0.05(F=51.43,P=0.000)。反之,eIF4E的mRNA相對表達量由1.01±0.09逐漸降低至0.47±0.06(F=20.52,P=0.000
6、),蛋白相對表達水平由0.97±0.02逐漸降低至0.64±0.09(F=14.70,P=0.001)。流式細胞術檢測TRIM22過表達后ATRA干預組(78.8±2.0)%比空載體ATRA干預組(58.7±2.7)%的PE-CD11b表達水平高(t=9.54,P=0.000);共轉(zhuǎn)染后ATRA干預組(61.6±3.8)%比TRIM22過表達后ATRA干預組PE-CD11b表達水平(78.8±2.0)%低(t=8.19,P=0.000)
7、。過表達TRIM22組的NB4細胞72h后增殖抑制率(0.25±0.01)%高于空載體組(0.03±0.02)%(t=15.47,P=0.000)。同時,過表達TRIM22基因水平后,eIF4E蛋白水平會降低(t=4.99,P=0.007)。CO-IP實驗驗證TRIM22通過結(jié)合eIF4E而作用。
結(jié)論:在ATRA誘導HL-60,NB4細胞粒系分化過程中,TRIM22的mRNA及蛋白表達水平逐漸升高,而eIF4E的mRNA及蛋
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