eIF4E在急性髓細(xì)胞白血病中的表達(dá)研究.pdf

1、目的:
　　1、通過RT-PCR法檢測(cè)急性髓細(xì)胞白血病(AML)與非腫瘤對(duì)照者骨髓標(biāo)本eIF4E的表達(dá)情況，比較eIF4E在AML與非腫瘤對(duì)照組之間的表達(dá)差異。
　　2、檢測(cè)AML誘導(dǎo)治療前后eIF4E表達(dá)情況，觀察誘導(dǎo)治療前后eIF4E表達(dá)差異。
　　3、計(jì)算M4、M5型AML與其他亞型AML eIF4E表達(dá)情況，進(jìn)一步比較不同亞型AML之間eIF4E表達(dá)的差異。
　　4、統(tǒng)計(jì)AML基因突變的表達(dá)情況，分析eI

2、F4E表達(dá)與AML其他分子生物學(xué)異常的相互關(guān)系。
　　方法:
　　1、標(biāo)本采集:采集初診AML、誘導(dǎo)治療達(dá)完全緩解AML及非腫瘤對(duì)照者骨髓標(biāo)本，提取單個(gè)核細(xì)胞，加入TRIzol試劑充分裂解細(xì)胞，-80℃冷凍保存。AML診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)符合張之南《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》。非腫瘤對(duì)照者納入疾病包括免疫性血小板減少癥、良性疾病導(dǎo)致的缺鐵性貧血。
　　2、實(shí)驗(yàn)分組:將初診AML設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，非腫瘤對(duì)照者設(shè)為對(duì)照組。將實(shí)驗(yàn)組能夠耐受

3、并同意化療者進(jìn)行常規(guī)誘導(dǎo)化療，其中，非M3型AML化療方案為DA(柔紅霉素45-60mg/m2/d×3d、阿糖胞苷100-150mg/m2/d×7d)或IDA（去甲氧柔紅霉素8-12mg/m2/d×3d、阿糖胞苷100-150mg/m2/d×7d）標(biāo)準(zhǔn)誘導(dǎo)方案;M3型AML化療方案為維甲酸+三氧化二砷（維甲酸20mg/m2/d口服至完全緩解、三氧化二砷0.16mg/kg/d靜脈注射至完全緩解）雙誘導(dǎo)方案，并根據(jù)個(gè)體情況加用蒽環(huán)類藥物化療

4、。
　　3、檢測(cè)方法:根據(jù)人eIF4E基因mRNA序列設(shè)計(jì)引物(NM_001130679)，eIF4E上游引物:5'-ACGGAATCTA ATCAGGAGGT-3'，下游引物:5'-TTCCCACATAGG CTCAATAC-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為246bp。根據(jù)人β-actin基因mRNA序列設(shè)計(jì)引物(BC_002409)，β-actin上游引物:5'-CTGGGACGACATGGAGAAA A-3'，下游引物:5'-AAGGA

5、AGGCTGGAAGAGTGC-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為564bp。使用淋巴細(xì)胞分離液提取單個(gè)核細(xì)胞，使用TRIzol試劑等抽提RNA，并用AMV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系中分別加入β-actin、eIF4E引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，使用瓊脂糖凝膠電泳鑒定β-actin、eIF4E的表達(dá)。
　　4、統(tǒng)計(jì)分析:根據(jù)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定量資料兩組間比較采用t檢驗(yàn)，定性資料兩組間比較采用卡方檢驗(yàn)，定性資料關(guān)聯(lián)性分析采

6、用卡方檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1、本實(shí)驗(yàn)通過RT-PCR法檢測(cè)AML骨髓標(biāo)本eIF4E表達(dá)情況，測(cè)得55例初診AML中36例eIF4E陽(yáng)性表達(dá)，eIF4E陽(yáng)性率為65.5％，經(jīng)誘導(dǎo)治療達(dá)完全緩解后3例AML骨髓細(xì)胞eIF4E由陽(yáng)性轉(zhuǎn)為陰性，非腫瘤對(duì)照者eIF4E全部陰性。
　　2、18例M4、M5型AML中15例eIF4E陽(yáng)性表達(dá)，eIF4E陽(yáng)性率為83.3％，37例其他亞型AML中21例eIF4E陽(yáng)性表達(dá)，eIF4E

7、陽(yáng)性率為56.8％，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示M4、M5型AML與其他亞型AMLeIF4E表達(dá)無差異(P＞0.05)。
　　3、55例初診AML中，4例FLT3/ITD基因突變陽(yáng)性表達(dá)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示eIF4E表達(dá)與FLT3/ITD基因突變表達(dá)無相關(guān)性(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、部分初診AML eIF4E高表達(dá)，誘導(dǎo)治療達(dá)完全緩解后少部分AML骨髓細(xì)胞eIF4E表達(dá)水平下降。eIF4E表達(dá)水平有可能作為AML控制情況的