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文檔簡介
1、為了研究Sry基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),采用siRNA技術(shù)使Sry基因沉默,探討了有效沉默Sry基因的途徑和最佳條件。 我們設(shè)計、合成針對小鼠Sry基因的發(fā)夾狀寡核苷酸鏈,退火后連入真核表達載體pSilencer4.1-CMVneovector,構(gòu)建以小鼠Sry基因為靶點的siRNA干涉載體pSilencer4.1/Sry217及pSilencer4.1/Sry565,通過尾靜脈注射法將載體質(zhì)粒導(dǎo)入妊娠小鼠體內(nèi),于小鼠妊娠第11.5天,即
2、11.5dpc(dayspostcoitum,性交后天數(shù))取出胚胎,采用雙重PCR法對胚胎進行性別鑒定,鑒定為雄性的胚胎采用半定量RT-PCR法檢測Sry基因的表達量,研究不同干擾序列、不同注射時間及注射劑量對Sry基因表達量的影響。 研究結(jié)果,確定了質(zhì)粒的最佳注射時間為9.5dpc,注射劑量為20μg,注射干擾質(zhì)粒pSilencer4.1/Sry565對Sry基因的抑制效率達85%左右。表明:siRNA可以顯著抑制雄性胚胎Sr
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