小鼠胚胎Sry基因的RNA干涉研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了研究Sry基因的調(diào)控網(wǎng)絡，采用siRNA技術使Sry基因沉默，探討了有效沉默Sry基因的途徑和最佳條件。 我們設計、合成針對小鼠Sry基因的發(fā)夾狀寡核苷酸鏈，退火后連入真核表達載體pSilencer4.1-CMVneovector，構(gòu)建以小鼠Sry基因為靶點的siRNA干涉載體pSilencer4.1/Sry217及pSilencer4.1/Sry565，通過尾靜脈注射法將載體質(zhì)粒導入妊娠小鼠體內(nèi)，于小鼠妊娠第11.5天，即

2、11.5dpc(dayspostcoitum，性交后天數(shù))取出胚胎，采用雙重PCR法對胚胎進行性別鑒定，鑒定為雄性的胚胎采用半定量RT-PCR法檢測Sry基因的表達量，研究不同干擾序列、不同注射時間及注射劑量對Sry基因表達量的影響。 研究結(jié)果，確定了質(zhì)粒的最佳注射時間為9.5dpc，注射劑量為20μg，注射干擾質(zhì)粒pSilencer4.1/Sry565對Sry基因的抑制效率達85％左右。表明：siRNA可以顯著抑制雄性胚胎Sr

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