蛋白激酶Cβ基因單核苷酸多態(tài)性及血漿表達(dá)水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種以多種自身抗體產(chǎn)生和多器官損害為特征的自身免疫性疾病，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜，病程遷延反復(fù)，對(duì)患者身心健康造成較大影響，已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。已有研究表明SLE的發(fā)生與 T、B淋巴細(xì)胞的高度活化、免疫球蛋白增多等機(jī)體的免疫異常有關(guān)，其中以 B細(xì)胞增殖分化和功能異常最為突出。B細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生大量的自身抗體介導(dǎo)組織和器官損傷，遞呈抗原給自身反應(yīng)性

2、 T細(xì)胞，以及產(chǎn)生可溶性介質(zhì)觸發(fā)、維持炎癥反應(yīng)，參與SLE發(fā)病機(jī)制的多個(gè)環(huán)節(jié)。
　　核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear factorκB，NF-?B）是參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)T細(xì)胞的活化、增殖以及調(diào)節(jié)B細(xì)胞免疫球蛋白基因的表達(dá)起著關(guān)鍵作用。已有證據(jù)顯示，B細(xì)胞受體（B cell receptor, BCR）介導(dǎo)的NF-?B信號(hào)通路的激活參與了SLE的發(fā)病。蛋白激酶C（protein kinase Cβ, PKCβ）是BC

3、R介導(dǎo)的NF-?B信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子，可以通過(guò)BCR介導(dǎo)的NF-?B信號(hào)通路的激活，對(duì)成熟B細(xì)胞的存活起重要作用。B淋巴細(xì)胞瘤xL（B-cell lymphoma xL，Bcl-xL）和B淋巴細(xì)胞瘤2（B-cell lymphoma2，Bcl-2）是Bcl-2蛋白家族的兩個(gè)成員，均具有抑制細(xì)胞凋亡的作用。已有研究表明NF-?B可以誘導(dǎo)抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL等表達(dá)失調(diào)，PKCβ缺陷的B細(xì)胞存活時(shí)間短也與Bcl-2、Bcl-x

4、L的表達(dá)失調(diào)有關(guān)。同時(shí)，Bcl-2、Bcl-xL還可以通過(guò)影響B(tài)細(xì)胞功能造成大量自身免疫性抗體堆積，參與SLE的發(fā)病過(guò)程。
　　目前已有在中國(guó)華中、華南地區(qū)4199例SLE病人和8255例健康對(duì)照中的研究表明，PKCβ基因多態(tài)性位點(diǎn)rs16972959與SLE遺傳易感性相關(guān)，但缺少在皖籍漢族人群中的報(bào)道，且未研究rs16972959基因頻率與SLE相關(guān)臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等疾病特征之間的關(guān)系。因此，本研究擬分析皖籍漢族SLE患者及

5、健康對(duì)照者PKCβ基因多態(tài)性位點(diǎn)rs16972959與SLE遺傳易感性之間的關(guān)聯(lián)。同時(shí)，采用ELISA方法檢測(cè)SLE患者和健康對(duì)照中PKCβ、Bcl-xL和Bcl-2血漿表達(dá)水平，比較兩組間差異，探討三者血漿表達(dá)水平之間的關(guān)系，并結(jié)合臨床特征，分析PKCβ、Bcl-xL和Bcl-2血漿表達(dá)水平與SLE疾病活動(dòng)度及不同臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的關(guān)系。
　　第一部分蛋白激酶Cβ基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)性研究
　　

6、目的：比較 SLE患者和健康對(duì)照 PKCβ基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（rs16972959）基因型和等位基因頻率的差異，探討其與SLE遺傳易感性的關(guān)系。同時(shí)結(jié)合臨床特征，分析其與SLE主要臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的關(guān)系。
　　方法：本研究共納入SLE病例400例，均來(lái)自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和附屬省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，診斷標(biāo)準(zhǔn)符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的SLE分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)。納入健康對(duì)照400例，來(lái)自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院健康體檢中

7、心健康志愿者。采用 TaqMan探針基因分型技術(shù)檢測(cè) SLE病例組和健康對(duì)照組 PKCβ基因位點(diǎn)rs16972959的基因型和等位基因頻率，結(jié)果采用SPSS10.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，使用χ2檢驗(yàn)或確切概率法比較SLE病例組和健康對(duì)照組基因型和等位基因頻率的分布差異。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　(1)哈迪-溫伯格檢驗(yàn)：對(duì)照組基因分型的結(jié)果符合哈迪-溫伯格平衡（χ2=1.523， P=0.217）。
　　(2

8、) PKCβ（rs16972959）基因分型：SLE患者組rs16972959位點(diǎn)基因A/A, A/G和G/G的基因型頻率分別為3.75％,33.75%和62.50%，對(duì)照組分別為8.00%,36.75%和55.25%，兩組基因型的分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.816， P<0.001）。對(duì)兩組間等位基因頻率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)， PKCβ-34277227A/G（rs16972959）最小等位基因 A的基因頻率在 SLE病例組和對(duì)照組間

9、分別為20.63%和26.37%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.356，P=0.007)。
　　(3)基因分型與主要臨床癥狀的關(guān)聯(lián)：rs16972959基因位點(diǎn)A/A, A/G和G/G的基因型分布與蝶形紅斑、盤(pán)狀紅斑、光敏感、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎、漿膜炎、腎臟病變和血液學(xué)異常均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（均有P＞0.05）。
　　(4)基因分型與主要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系：rs16972959基因位點(diǎn)A/A, A/G和G/G的基因型分布與抗核抗體、

10、抗雙鏈DNA抗體、抗Sm抗體、抗SSA抗體、抗SSB抗體和抗核糖核蛋白抗體之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（均有P＞0.05）。而rs16972959基因型分布在抗核糖體 P蛋白抗體陽(yáng)性組和陰性組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.361，P=0.042）。
　　結(jié)論：該研究人群中 PKCβ基因單核苷酸多態(tài)性（rs16972959）與 SLE的遺傳易感性有關(guān)，rs16972959位點(diǎn)的G等位基因與該人群SLE的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高有關(guān)。
　　第二部

11、分蛋白激酶Cβ血漿表達(dá)水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的相關(guān)性研究
　　目的：比較SLE病例組與健康對(duì)照組、SLE腎炎組與非腎炎組以及活動(dòng)期SLE病例與非活動(dòng)期SLE病例之間血漿PKCβ，Bcl-xL和BCL-2表達(dá)水平的差異，分析PKCβ，Bcl-xL和BCL-2表達(dá)水平之間的相關(guān)性以及三者表達(dá)水平與SLE臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的關(guān)系。
　　方法：選取80例安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和附屬省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科確診的SLE患者作為病例

12、組，收集一般情況、臨床資料和實(shí)驗(yàn)室資料。所有的患者均符合1997年修訂的SLE分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)。選取80例安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院健康體檢中心健康志愿者作為對(duì)照組，收集一般情況資料。采用 ELISA試劑盒分別檢測(cè)PKCβ、Bcl-xL和BCL-2的血漿表達(dá)水平。采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較分析病例組與對(duì)照組PKCβ、Bcl-xL和BCL-2血漿表達(dá)水平之間的差異。使用SPSS10.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：

13、r>　　(1) SLE病例組和健康對(duì)照組血漿中PKCβ的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.62， P=0.535）；SLE病例組 Bcl-xL血漿表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.00, P<0.001)；Bcl-2在SLE病例組中的血漿表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.18, P=0.031)。
　　(2) SLE病例組和對(duì)照組血漿中PKCβ表達(dá)水平與Bcl-xL和Bcl-2表達(dá)水平之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（均

14、有P＞0.05），SLE病例組中Bcl-xL與Bcl-2血漿表達(dá)水平之間也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（rs=0.035，P=0.820），而對(duì)照組Bcl-xL與Bcl-2血漿表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.342，P=0.007）。
　　(3) SLE相應(yīng)臨床表現(xiàn)陽(yáng)性組與陰性組之間PKCβ、Bcl-xL和Bcl-2血漿表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均有P＞0.05）。
　　(4) SLE不同實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與PKCβ和Bcl-2血漿表達(dá)水平之間均無(wú)