脈沖電流經(jīng)皮刺激運動性疲勞大鼠肝區(qū)對其肝細胞線粒體功能影響的實驗研究.pdf

1、背景：
　　運動性疲勞是部隊軍事訓練中常見的問題，當運動性疲勞發(fā)生后，如果機體疲勞不及時糾正和恢復，日積月累后，會引起“過勞”，并導致“慢性疲勞綜合征”等亞健康狀態(tài)的出現(xiàn)，嚴重影響正常的軍事體能訓練。目前，所采取的各種抗疲勞措施，其效果多收效甚微，如何采用簡便有效科學的方法來緩解運動性疲勞，提升訓練成績，同時減少運動性損傷的發(fā)生，是一個有研究價值和迫切需求的課題。所以，對于如何延緩運動性疲勞的發(fā)生發(fā)展及如何加快運動性疲勞的恢復，是

2、分子生物化學、軍事訓練醫(yī)學及運動醫(yī)學等學科研究的熱點之一。通過進一步研究以期闡述脈沖電流經(jīng)皮刺激運動性疲勞大鼠肝區(qū)和大鼠肝臟線粒體氧化呼吸相關酶活性之間的密切關系，并豐富和完善脈沖電流經(jīng)皮刺激運動性疲勞大鼠肝區(qū)相關系列的研究，為“脈沖電流經(jīng)皮刺激儀”的投入實際應用提供更多充實完善的理論依據(jù)。
　　目的：
　　通過無負重的力竭性游泳運動方式，建立運動性疲勞的實驗動物模型，密切觀察脈沖電流經(jīng)皮刺激運動性疲勞大鼠肝區(qū)對其肝臟線粒體

3、細胞呼吸鏈酶復合物活性，以及對大鼠肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶活性和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的不同影響，進一步探討和闡述脈沖電流經(jīng)皮刺激運動性疲勞大鼠肝區(qū)和運動性疲勞之間的關系，了解運動性疲勞后線粒體主要酶的活性改變以及脈沖電流經(jīng)皮刺激干預方式對肝臟能量代謝的影響，豐富和完善脈沖電流經(jīng)皮刺激運動性疲勞大鼠肝區(qū)對于緩解運動性疲勞的相關研究。
　　方法：
　　選擇健康狀況良好的8周齡雄性Wistar大鼠共80只，實驗

4、動物體重為204±15g，均由河南省醫(yī)學實驗動物中心提供，飼養(yǎng)室的溫度保持在23±2℃，濕度維持在41％±15％，實驗動物均分籠飼養(yǎng)，全部自由光照、攝食以及飲水，適應性地喂養(yǎng)1w，為了減少實驗的誤差，確保所有實驗大鼠在實驗進行前均沒有進行過游泳性訓練運動。將實驗動物隨機分成安靜對照組（A組）、疲勞對照組（B組）、疲勞前刺激組（C組）和疲勞后刺激組（D組），共四組，每組動物各占18只，剩余的8只動物留作備用。實驗動物按組別分籠飼養(yǎng)。實驗干

5、預進行前3d，每只實驗大鼠每天適應性游泳練習30min，泳池水溫保持在32±1℃，泳池水深至少70cm以上，然后進行5周的實驗干預措施。其中每周B組、C組及D組的大鼠游泳訓練6d，休息1d，游泳2次/日，每次所有動物均達到力竭的狀態(tài)，當實驗大鼠浮在水面漂浮靜止不動時用木棒輕微驅趕，保證實驗動物一直處于游泳運動的狀態(tài)。實驗動物的游泳力竭標準，以實驗動物下沉后10s內(nèi)不能露出水面為標準，記錄每組每只實驗動物的游泳力竭時間。每組大鼠游泳后更換

6、清水。在每次游泳訓練結束后使用干毛巾將實驗動物皮毛擦拭干凈，置于暖風的環(huán)境中烘干實驗動物的皮毛，減少感冒的發(fā)生率和大鼠的意外死亡。B、D組的大鼠在游泳運動結束后，C組的大鼠在游泳運動開始前分別采取腹腔注射鹽酸氯胺酮注射液0.25g/kg的麻醉方式對實驗大鼠進行麻醉。C組的大鼠在游泳運動前，D組的大鼠在游泳運動力竭后分別給予頻率為1024Hz的脈沖電流刺激大鼠肝區(qū)，電流刺激強度均為10mA，間動周期為1s，時間20min。各組實驗大鼠分別

7、于第1、3、5周休息日分批處死，動物處死前禁食水過夜，采取斷頭處死的方法，剖腹取肝臟標本1g，用液氮迅速冷凍保存以備用。肝臟標本溶化后仍保持2-8℃的溫度，眼科剪剪碎后，加入9ml的PBS液(PH7.4)，用超聲勻漿器將標本勻漿充分。離心20min（3000轉/分）。收集上清液，分裝后一份待檢測，其余冷凍備用，整個操作過程均在0-4℃中進行。采用分光光度法來測定三周各組動物的肝臟線粒體氧化呼吸鏈酶復合物(Ⅰ～Ⅳ)及線粒體Na+-K+-A

8、TP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性，實驗動物肝臟線粒體的蛋白定量采用Bradfood蛋白定量法進行測定。
　　結果：
　　1.力竭時間觀察:第1周末3組大鼠的游泳力竭時間差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;第3周末疲勞對照組（B組）大鼠的力竭時間短于疲勞前刺激組（C組）及疲勞后刺激組（D組），疲勞前刺激組（C組）和疲勞后刺激組（D組）大鼠游泳力竭時間差異比較沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而疲勞后刺激組（D組）和疲勞

9、對照組（B組）、疲勞前刺激組（C組）大鼠游泳力竭時間差異比較具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;第5周末疲勞對照組（B組）大鼠力竭時間短于疲勞前刺激組（C組）和疲勞后刺激組(D組)，疲勞對照組（B組）和疲勞前刺激組（C組）大鼠游泳力竭時間差異比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而疲勞后刺激組（D組）和疲勞對照組（B組）、疲勞前刺激組（C組）大鼠游泳力竭時間差異比較具有統(tǒng)計學意義。
　　2.大鼠肝臟線粒體氧化呼吸鏈酶復合物(Ⅰ～Ⅳ)活性的

10、比較:第1周末4組大鼠肝臟線粒體氧化呼吸鏈酶復合物(Ⅰ～Ⅳ)活性的比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）;安靜對照組（A組）、疲勞前刺激組（C組）及疲勞后刺激組（D組）大鼠肝臟線粒體氧化呼吸鏈酶復合物(Ⅰ～Ⅳ)活性水平在第3、5周末均高于疲勞對照組（B組），且差異比較有統(tǒng)計學上的意義(P＜0.05）。疲勞后刺激組（D組）大鼠的肝臟線粒體氧化呼吸鏈酶復合物(Ⅰ～Ⅳ)活性水平在第3、5周末均高于疲勞前刺激組（C組），且差異的比較有統(tǒng)計學意義(

11、P＜0.05）。
　　3.線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的比較:第1周末4組大鼠肝細胞線粒體的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性水平的差異比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);安靜對照組（A組）、疲勞前刺激組（C組）及疲勞后刺激組（D組）大鼠的肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性水平在第3、5周末高于疲勞對照組（B組），且差異比較有統(tǒng)計學上的意義(P＜

12、0.05）。疲勞前刺激組（C組）大鼠肝臟線粒體的Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性水平在第3、5周末均高于疲勞后刺激組（D組），且差異比較有統(tǒng)計學上的意義(P＜0.05）。
　　結論：
　　1.運動性疲勞會降低大鼠肝臟線粒體氧化呼吸鏈酶復合物(Ⅰ～Ⅳ)及肝臟線粒體Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性水平，導致運動成績的下降。
　　2.脈沖電流經(jīng)皮刺激運動性疲勞大鼠肝區(qū)可以提高