Cr(Ⅵ)對(duì)大鼠離體肝細(xì)胞線粒體呼吸功能的影響.pdf

1、目的：探討Cr(Ⅵ)對(duì)大鼠離體肝細(xì)胞線粒體呼吸功能的影響及NAC在Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)線粒體呼吸功能障礙中的保護(hù)作用。
　　 方法：將大鼠離體肝細(xì)胞線粒體隨機(jī)分為8組,即空白對(duì)照組、NAC對(duì)照組、ROT對(duì)照組、ROT+NAC對(duì)照組、Cr(Ⅵ)處理組、NAC+Cr(Ⅵ)處理組、ROT+Cr(Ⅵ)處理組、NAC+ROT+Cr(Ⅵ)處理組。在體外試驗(yàn)系統(tǒng),使用線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體Ⅰ抑制劑魚藤酮(ROT)(10μmol/L)和ROS清除劑N-

2、乙酰-L-半胱氨酸(NAC)(1mmol/L)預(yù)處理大鼠離體肝細(xì)胞線粒體30分鐘,加入受試物Cr(Ⅵ)(50μmol/L)繼續(xù)處理30分鐘后,觀察反映線粒體功能損傷的各項(xiàng)指標(biāo)。經(jīng)不同處理后的線粒體分別用熒光分光光度計(jì)檢測線粒體中ROS生成、PTP開放度、跨膜電位(△ψm),紫外可見光分光光度計(jì)檢測線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體Ⅰ-Ⅴ活性,Clark氧電極檢測線粒體呼吸耗氧量,用PCR基因擴(kuò)增技術(shù)檢測mtDNA基因突變。
　　 結(jié)果：⑴Cr

3、(Ⅵ)對(duì)ROS生成的影響:與對(duì)照組相比,各Cr(Ⅵ)處理組中ROS的生成增多,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。與單獨(dú)Cr(Ⅵ)處理組相比,NAC+Cr(Ⅵ)處理組的生成有顯著性下降(P＜0.05),而ROT+Cr(Ⅵ)處理組和ROT+NAC+Cr(Ⅵ)處理組的ROS生成有顯著性上升(P＜0.05)。⑵Cr(Ⅵ)對(duì)PTP開放度的影響:與對(duì)照組相比,Cr(Ⅵ)處理組的PTP開放度增加,差異有顯著性(P＜0.05)。與單獨(dú)Cr(Ⅵ)處理組相比

4、,NAC+Cr(Ⅵ)處理組的PTP開放程度有所下降,而ROT預(yù)處理后的Cr(Ⅵ)處理組開放程度上升。⑶Cr(Ⅵ)對(duì)線粒體跨膜電位(△ψm)的影響:各Cr(Ⅵ)處理組與對(duì)照組相比,線粒體跨膜電位(△ψm)降低引起的熒光值上升具有顯著性(P＜0.05)。經(jīng)NAC預(yù)處理的Cr(Ⅵ)處理中熒光值的上升幅度相對(duì)于單獨(dú)Cr(Ⅵ)處理中的要小,而經(jīng)ROT預(yù)處理的Cr(Ⅵ)處理組中熒光值上升的幅度最大。⑷Cr(Ⅵ)對(duì)線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體Ⅰ-Ⅳ活性的影響

5、:各Cr(Ⅵ)處理組與對(duì)照組相比,線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體Ⅰ-Ⅳ活性下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05):Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組較空白對(duì)照,復(fù)合體Ⅰ-Ⅳ活性分別下降43.19％、19.2％、71.66％和59.63％;相較于ROT對(duì)照組,ROT+Cr(Ⅵ)處理組中復(fù)合體Ⅰ-Ⅳ活性分別下降61.36％、40％、83.33％和84.47％:NAC+Cr(Ⅵ)處理組復(fù)合體Ⅱ-Ⅳ活性較Cr(Ⅵ)處理組分別上升5％、11.54％和15.38％。⑸Cr(Ⅵ

6、)對(duì)呼吸鏈酶復(fù)合體Ⅴ(ATP酶)活性的影響:Cr(Ⅵ)處理后的線粒體Na+K+-ATPase、Ca2+-ATPase的活力及兩者之和,與對(duì)照組相比,活力下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與Cr(Ⅵ)單獨(dú)處理組相比,NAC+Cr(Ⅵ)處理組三者都有顯著性上升,而ROT+Cr(Ⅵ)處理組三者都有顯著性下降。NAC+ROT+Cr(Ⅵ)處理組中,三者的活性在ROT+Cr(Ⅵ)處理組和NAC+Cr(Ⅵ)處理組之間。⑹Cr(Ⅵ)對(duì)線粒體呼吸耗氧量

7、的影響:與對(duì)照組相比,各Cr(Ⅵ)處理組ST3、ST4和RCR均有明顯下降(P＜0.05)。與單獨(dú)Cr(Ⅵ)處理組相比,NAC預(yù)處理后的Cr(Ⅵ)處理組三者都有所回升(P＜0.05),而ROT預(yù)處理后的Cr(Ⅵ)處理組ST3、ST4和RCR下降更為明顯(P＜0.05)。⑺Cr(Ⅵ)對(duì)mtDNA的影響:ROT和Cr(Ⅵ)聯(lián)合作用導(dǎo)致線粒體ATPase6基因的3處突變,經(jīng)NAC處理后,兩者引起的突變消失。
　　 結(jié)論：Cr(Ⅵ)可誘